气相色谱一质谱法测定茶叶中香豆素的含量

２１４质谱学报第３０卷增刊气相色谱一质谱法测定茶叶中香豆素的含量招云芳１’２，陆舍铭１，刘春波１’３，曹秋娥２，缪明明４（１．云南红塔烟草（集团）有限责任公司技术中心，云南玉溪６５３１００；２．云南大学化学科学与工程学院，云南昆明６５００９１・３．云南民族大学化学与生物技术学院，云南昆明６５００３１；４．云南烟草科学研究院云南昆明６５０１０６）ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＣｏｕｍａｒｉｎｉｎＴｅａｓｂｙＺＨＡＯＹｕｎ．ｆａｎ９１”，ＬＵＳｈｅ．ｍｉｎ９１，ＬＩＵＣｈｕｎ－ｂ０１ｒ，ＣＡＯ（１．Ｒ＆ＤＣｅｎｔｅｒＹｕｎｎａｎＧＣ／ＭＳＱｉｕ－ｅ２，ＭＩＡＯＭｉｎｇ—ｍｉｎ９４ｏｆＨｏｎｇＴａ而施仰ＧｒｏｕｐＣｏ．，ｌ＿ｚｚＬ，Ｙｕｘｉ６５３１００，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＫｕｎｍｉｎｇ６５００３１，Ｃｈｉｎａ；４．ＹｕｎｎａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｏｂａｃｃｏＳｃｉｅｎｃｅ，ＫｕｎｍｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５００９１，Ｃｈｉｎａ；３．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＹｕｎｎａｎＮａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，６５０１０６，Ｃｈ／ｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＣｏｕｍａｒｉｎｉｎｔｅａｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＧＣ＿ＪＭＳ．Ｔｈｅｔｅａｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅｕｓｉｎｇａｓｏｎｉｃａｔｏｒ，ｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙａＳｉｌｉｃａｃｏｌｕｍｎ．ａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＧＣ，ＭＳｗｉｔｈｓｅｌｅｃｔｉｏｎｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｍｏｄｅ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃＩｌｌ＂Ｖｅｃｏｕｎ＇ｌａｌｌ血ｉｓｌｉｎｅａｒ（Ｒ＝０．９９９８１ｂｅ柏，嘲Ｏ．０５ｎａｇ・Ｌ～ａｎｄ４ｒｎｇ・Ｌ～．Ｔｈｅｐｒｅｃｉｓｉｏｎ８ｉｓｐｅｒｆｅｅｔ（ＲＳＤ＝－２．８０％１．Ｔｈｅｃｏｕｍｍｎａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓａｍｆｒｏｍ９６．２２％ｔｏ１００．４４％．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｉｓｎａｇ・Ｌ～．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｕｍａｔｉｎｉｎｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＧＣ／ＭＳ：ｃｉｇａｒｅｔｔｅ中图分类号：０６５７．６３文献标识码：Ａ文章编号：１００４－２９９７（２００９）增刊－０２１４－０２香豆素是主要豆香型香料之一，常用于日用香精中【ｌ】。但毒理实验发现，香豆素对小鼠胚胎有毒性，能引起痛觉消失，使中性胆碱醋酶发生变化，对大鼠为可疑致肿瘤物【２】。此外，香豆素还会转化为毒性物质双香豆素，双香豆素具有抗凝血作用，会导致动物毛细血管出血而使机体广泛出血，最终使动物内脏器官受损［３－４］，因此，对茶叶中香豆素含量的测定很有意义。香豆素的定量分析方法主要有紫外分光光度法【５】，薄层扫描法，高效液相色谱法【６１和气相色谱法【７Ｊ。本工作采用ＧＣ／ＭＳ联用技术对几种茶叶进行检测，并选用性质与香豆素相似的乙酸苯乙酯为内标物进行定量分析。１实验部分１．１主要仪器、试剂与材料Ｃｌａｍｓ６００气相色谱和质谱：美国ＰＥ公司产品；ＴｕｒｂｏＶａｐＩＩ氮吹仪：ＣａｌｉｐｅｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓＴｅｃｈｎｉｃａｌＳｕｐｐｏｒｔＣｅｎｔｅｒ产品；固相萃取小柱Ｓｉｌｉｃａ３ｅｃ（５００ｍｇ）：美国Ｗａｔｅｒｓ公司产品。香豆素（９９％）：Ｊ＆ＫＣｌ｛ＥＭＩＣＡＬＬＴＤ产品；二氯甲烷（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司产品；乙酸苯乙酯（９８％）；茶叶：市售购买。１．２色谱条件色谱柱为ＨＰ．５ＭＳ柱（３０ｍ×０．２５０ｍｍ×０．２５¨ｍ）；进样量ｌｌａＬ；载气（高纯氦气）流速１．０ｍＬ．ｍｉｎ～，分流比１０：１；气化室温度２５０℃；程序升温：初温１００℃，保留ｌｍｉｎ，以作者简介：招云芳（１９８２－），女，云南玉溪人，硕士研究生。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｉｎｃｘｙｆｌ９８２＠１２６．伽通信作者：陆舍铭（１９７６－），男，江苏美堰人，博士，从事烟草化学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：蛐ｇ＠ｓｄｍ．ｃｏｒｎ２００９年１１月质谱学报ｍｉｎ。２１５３℃．ｍｉｎ＿１升温至１６０℃，继续以２０℃．ｍｉｎｌ升至２８０℃，保留２０１．３质谱条件ＥＩ源；电离电压７０ｅｖ；离子源温度２３０℃；质量扫描范围：ａｄｚ５０－－４００；进样量１ｕＬ．分流比１０：１；离子选择：ａｄｚ谱库和ＮＩＳＴ谱库。１Ａ样品的处理１０４，ａｄｚ１１８１扫描时间分别为：７．５—９．５ｍｉｎ，１３—１５ｍｉｎｌ谱图检索：ＷＩＬＥＹ把茶叶磨成粉末，准确称取２ｇ茶叶粉末，每个样品加入５ⅡｌＬ内标液乙酸苯乙酯，再加入４５２５ｍＬ二氯甲烷进行萃取。超声２０ｒａｉｎ，过滤，移取１０．Ｏｎ１Ｌ萃取液，用活化好的固相萃取柱纯化，并用ＩＩｌＬ二氯甲烷冲洗，氮吹至１．０ｍＬ，待测。２结果与讨论２．１线性关系与检测限按上述色谱条件分别检测一系列浓度水平的标准溶液各１ＩｌＬ，测定峰面积，用仪器提供的软件采用内标法做出标准曲线。结果表明，在０．０５～４ｎ培．Ｌ－１范围内，均与对应的峰面积比呈线性关系。香豆素的线性回归方程：Ｙ＝２．５４４３ｘ＋０．０５８２．２精密度及回收率实验准确称取２ｇ某茶叶粉末，平行称６份，按１．４方法处理，测得的结果分别为０．５８６０．５６９４、０．５６１６、０．６０１８、０．５９３２６、０．５６６８、８，Ｒ＝０．９９９８，最低检测限为８此．Ｌ＿１（Ｓ／Ｎ＝３）。ｌａｇ．ｇ～，计算ＲＳＤ为２．８０％，说明实验的精密度较高。在已知香ｍｇ．Ｌ＿１豆素含量的茶叶中分别加入１．０ｍＬ的０．５、１、２２．３样品的测定３个浓度的标准溶液，按照本方法测定，并根据样品的原含量、加标量和测定量计算回收率，结果得出本方法的回收率范围为９６．２２％～１００．４４％。对６种茶叶（糯米茶、青山绿水茶、红雪茶、白雪茶、铁观音、普洱茶）样品进行含量测定，每种茶叶样品平行测定３次，６种茶叶样品中均不含香豆素。３结论本工作建立的ＧＣ／ＭＳ法准确度和灵敏度均较高，操作简便、快速，适合于天然产物中香豆素含量的检测。参考文献：【１】杨松，贾英，毕开顺．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定桂枝中４种活性成分的含量［Ｊ】．药物分析杂志，２００４，２４＜２）：１４３—１４６．【２１王倩，于治国，李柯，等．反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中６，７．二甲氧基香豆素含量及其在药动学中的应用明．中国ｌｌ缶床药学杂志，２００２，１１（５）：２７２－２７４．【３】林生，刘明韬，王素娟，等．小蜡树香豆素类成分及其抗氧化活性【Ｊ】．中国中药杂志，２００８，３３（１４）：ｌ【４】ＩＲＥＳＯＮＣＩＬＰＡＲＩＳＨＤ，ＰＵＲＯＨＩＴ八ｅｔａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔ以：吐ｏｎｏｆ６６７８４（２乃）：３３７－３４２．７０９．ＣＯＭＴＥａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．ＴｈｅＪｏｕｍａｌｏｆＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２００３，【５】马逾英，钟世红，贾敏如，等．紫外分光光度法测定川白芷中总香豆素类成分的含量【Ｊ】．华西药学杂志。２００５，２０（２）：１５９—１６０．【６１ＳＨＡＲＩＨＳ，ＭＩＣＨＡＥＬＩＳＨＣ，Ｌ（ＹＩ＇ＩＥＲＥＲＢ，ｅｔａ１．Ｄ酏舶：ｎｉｍＩ的ｎｏｆｅｏｕｍａｒｉｎ，７－ｈｙｄｒｏｘｙ－ｃｏｕｍａｒｉｎ，７－ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ－８１ｕｃｕｒｏｎｉｄｅ，ａｎｄ３－ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎｂｙｈｉｇｈＬｉｑｕｉｄｐｃｄ砷粼ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｎｍｔｏｇｒａｐｈｙ，１９９６，１６（６）：１２６３・１２７８．【刀李洁，王超，武婷，等．气相色谱质谱法测定化妆品中三种香豆素类物质的含量叨．生命科学仪器，２００６，４（２）：３３．３５．