微阵列技术用于检测乳腺癌人表皮生长因子受体2基因状态

中华乳腺病杂志（电子版）２０１１年１Ｏ月第５卷第５期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｂｒｅａｓｔ　Ｄｉｓ（Ｅ１ｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｅｄｉｔｉｏｎ），０ｃｔ０ｂｅｒ　２０１１．Ｖ０１．５．Ｎ０．５　・９・　・临床研究　微阵列技术用于检测乳腺癌人表皮生长因子　受体２基因状态　蒋会勇　马永权张雪峰　【摘要】　目的探讨细胞核微阵列技术及组织微阵列技术用于检测乳腺癌组织中ＨＥＲ一２基因扩　增和蛋白表达状态。方法　将２４８例乳腺癌普通组织蜡块制成组织微阵列组，应用免疫组织化学法　（ＩＨＣ）和荧光原位杂交法（ＦＩＳＨ）分别检测ＨＥＲ一２基因和蛋白表达。两种检测方法的一致性采用检验，　并以ＦＩＳＨ检测结果为金标准，绘制ＩＨＣ检测乳腺癌ＨＥＲ－２表达的Ｒｏｅ曲线图。结果２４８例乳腺癌　ＦＩＳＨ与ＩＨＣ检测结果一致性分析显示：Ｋａｐｐａ＝０．７１１，Ｐ：０．０００，两种检测方法的一致性尚可。ＩＨＣ检　测乳腺癌ＨＥＲ－２　Ｒｏｅ曲线下面积为０．８８８，Ｐ＝０．０００，约登指数为０．７００，准确率为８７．９％。ＩＨＣ（＋＋）中　４例为１７号染色体单体型，占ＦＩＳＨ阳性病例总数的５．２６％（４／７６）。ＩＨＣ（＋＋＋）中５例为１７号染色体　多倍体型，ＦＩＳＨ检测均为阴性，占ＦＩＳＨ阴性总例数的２．９％（５／１７２）。ＩＨＣ的检测可以较好地反映出　ＦＩＳＨ的结果。结论细胞核微阵列及组织微阵列技术用于检ＯｎｊＪ￣．Ｌ腺癌ＨＥＲ・２基因状态有着节约实验　成本、同一性好、结果可靠的优点。　【关键词】组织微阵列；免疫组织化学法；荧光原位杂交；ＨＥＲ一２；乳腺肿瘤　【中图法分类号】　Ｒ６５５．８　【文献标识码】　Ａ　Ｎｕｃｌｅｉ　ａｎｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｉｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ＨＥＲ－２　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｌｆＡＮＧ　Ｈｕｉ—ｙｏｎｇ，ＭＡ　Ｙｏｎｇ—ｑｕａｒｔ，ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ　ｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｓｈｅｎｙａｎｇ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｒｅｇｉｏｎ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１００１６，Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ－ｒｅｎｇ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｕｉｙｏｎｇｊ＠１２６．ｃｏｒｎ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｕｓａｇｅ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉ　ａｎｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｉｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ＨＥＲ一２　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｗｏ　ｈｕｎｄｒｅｄ　ａｎｄ　ｆｏｒｔｙ—ｅｉｇｈｔ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｐａｒａｆｆｉｎ　ｅｍｂｅｄｄｅｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｂｌｏｃｋｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ　ｔｉｓｓｕｅ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ　ｇｒｏｕｐｓ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＨＣ）ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＨＥＲ一２　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｕｓｉｎｇ　Ｋａｐｐａ　ｔｅｓｔ．Ｔａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ＦＩＳＨ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｓ　ｔｈｅ　ｇｏｌｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ，ｔｈｅ　Ｒｏｅ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ＩＨＣ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ＨＥＲ－２　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｒａｗｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　Ｋａｐｐａ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ａｎ　ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ（Ｋａｐｐａ＝０．７１　１，Ｐ＝　０．０００）．Ｔｈｅ　ａｒｅａ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　Ｒｏｅ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ＩＨＣ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ＨＥＲ一２　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　０．８８８（Ｐ＝０．０００），ｔｈｅ　Ｙｏｕｄｅｎ’ｓ　ｉｎｄｅｘ　ｗａｓ　０．７００　ａｎｄ　ａｎ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｗａｓ　８７．９％．Ｆｏｕｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＩＨＣ（＋＋）ｃａｓｅｓ　ｈａｄ　ｈａｐｌｏｔｙｐｅ　ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　１７，ｗｉｔｈ　ａ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　５．２６％（４／７６）ｏｆ　ｔｈｅ　ＦＩＳＨ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃａｓｅｓ．Ｆｉｖｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＩＨＣ（＋＋＋）　ｃａｓｅｓ　ｈａｄ　ｐｏｌｙｐｌｏｉｄ　ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　１７。ｗｉｔｈ　ａ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　２．９％（５／１７２）ｏｆ　ｔｈｅ　ＦＩＳＨ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃａｓｅｓ，　ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ＩＨＣ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅｔｔｅｒ　ｒｅｆｌｅｃｔ　ＦＩＳＨ　ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｎｕｃｌｅｉ　ａｎｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ＨＥＲ一２　ｇｅｎｅ　ａｍｐｌｉｉｃａｔｉｆｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ　ｈａｓ　ｔｈｅ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｌｏｗ　ｃｏｓｔ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　ｔｉｓｓｕｅ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ；ｉｍｍｕｎｏｂｉｓｔｏｅｈｅｍｉｓｔｒｙ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ＨＥＲ－２；　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，近年　来乳腺癌发病率不断上升，而且有年轻化趋势，严　重威胁女性健康　。ＨＥＲ－２基因过度表达已被　作者单位：１１０８４０沈阳，沈阳军区总医院普通外科　证实与乳腺癌患者的预后及化疗、激素治疗的效　果密切相关　。　通信作者：张雪峰，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕｉｙｏｎｇｊ＠１２６．ＣＯＢ　・１０・　中华乳腺病杂志（电子版）２０１１年１０月第５卷第５期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｂｒｅａｓｔ　Ｄｉｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１ｌ，Ｖ０１．５，Ｎｏ．５　检测ＨＥＲ－２基因状态的方法很多，包括蛋白　水平和基因水平　。检测ＨＥＲ一２状态最客观的　方法是荧光原位杂交法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉ．　ｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）检测基因扩增和免疫组织化学法　（ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＩＨＣ）检测蛋白的表达情　况　Ｊ。笔者在相关检测过程中发明了细胞核阵列　加１Ｏ　ｔｘｌ　ＨＥＲ－２／ｎｅｕ　ＤＮＡ探针及ＣＥＰ１７探针，按探　针说明书混合，快速加一盖玻片，以封口胶封闭切　片，以防蒸发，３７℃孵育６～１６　ｈ，去除盖片，按照供　应商建议的强度和清洗条件洗涤探针，略干后　ＤＡＰＩ（４　，６－Ｄｉａｍｉｄｉｎｏ－２一ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ　ｄｉｈｙｄｒｏｃｈ　ｌｏｒ—　ｉｄｅ，４　，６．二氨基一２－苯基吲哚）复染，置荧光显微　镜下观察杂交结果。　１．４组织微阵列ＩＨＣ法检测乳癌ＨＥＲ－２蛋白的　方法（发明专利号：ＺＬ　２００５　１　０１００２１６．６）。。　进行　ＦＳＩＨ，同时采用组织微阵列组　的方法进行ＩＨＣ　检测，使所有检测在同一条件下进行，更具可比　性，同时节约了实验成本，实验结果更可靠。　１材料与方法　１．１临床标本　收集沈阳军区总医院２００８年５月一２０１０年　５月病理诊断明确的乳腺癌标本２４８例，患者均　为女性，平均年龄４８．３岁（３１～８４岁），所有病例　均经手术治疗。　１．２主要仪器及试剂　荧光显微镜：奥林巴斯ＢＸ６１型（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ　公司）；组织微阵列仪：ＭＴＡ１．Ｍａｎｕａｌ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ａｒｒａｙｅｒ　（德国Ｂｅｅｃｈｅｒ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ公司）；ＦＩＳＨ图像采集系　统：ＣＸ１３（黑白）（ＣＣＤ瑞士Ｂａｕｍｅｒ公司）；显微切　割仪：ＡＧ　２２３３１　Ｍｉｃｒｏ　Ｄｉｓｓｅｃｔｏｒ（德国Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ公　司）；探针：ＨＥＲ－２／ｎｅｕ　ＤＮＡ探针及ＣＥＰ１７探针和杂　交缓冲液购于美国ｖｙｓｉｓ公司。免疫组织化学ｓＰ试　剂盒购自北京中山生物技术有限公司；ＨＥＲ．２单克　隆抗体购于福州Ｍａｘｉｍ公司。　１．３细胞核阵列ＦＩＳＨ检测ＨＥＲ一２基因扩增　１．３．１从石蜡包埋组织中提取细胞核：先对石　蜡包埋组织进行ＨＥ染色，在显微镜下确定肿瘤　细胞密集的部位，切２０　ｍ厚石蜡切片，对照ＨＥ　染色片，利用显微切割仪切除非肿瘤组织及坏死　组织，按照文献［５］所述的方法进行细胞核提取。　１．３．２细胞核阵列的制作：为了使所有待测样　品在同一条件下检测及节约探针，笔者发明了利　用细胞制作阵列的技术，一次将１００例样品的细　胞排列在同一切片上进行实验　ｊ。　１．３．３荧光原位杂交：将预制的细胞阵列玻片浸　入固定液中固定１　ｈ。将玻片取出，空气中干燥后　置ｐＨ６．０的柠檬酸盐缓冲液中，微波加热１０　ｒａｉｎ，　取出置２ｘＳＳＣ溶液中，３７　ｃＣＩ置１５　ｒａｉｎ，０．４％胃　蛋白酶中适当消化，梯度乙醇（７０％，８５％，１００％）　脱水，各２　ｍｉｎ。移出玻片于１００％乙醇中，以纸　巾吸干乙醇，置４５℃～５０℃烤箱中蒸发乙醇。　表达　首先制作全部标本的组织微阵列蜡块，然后　采用常规ｓＰ法进行免疫组织化学染色，检测　ＨＥＲ－２蛋白的表达。为保证ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测的　一致性，在进行ＦＩＳＨ和ＩＨＣ时选取的是同一蜡　块标本。　１．５结果判断　免疫组织化学染色结果参照美国食品和药品　管理局（ＦＤＡ）标准　ｊ：光镜下观察以细胞膜棕黄　染色为阳性，分为０—３级：０级为无细胞染色或＜　１０％的肿瘤细胞胞膜较弱染色；１级为≥１０％的　肿瘤细胞胞膜部分较弱染色；２级为大于１０％的　肿瘤细胞胞膜完全较弱到中等染色；３级为大于　１Ｏ％的肿瘤细胞胞膜完全、均一强染色。所有结　果均经两次重复观察，计分不一致者经再次观察　确认。美国的一项调查显示，ＩＨＣ检测假阳性率　平均为１８％，ＦＩＳＨ为１３％　，因此２００７年美国　ＦＤＡ重新制定了乳腺癌ＩＨＣ及ＦＩＳＨ的标准，这　一标准将乳癌ＩＨＣ（＋十＋）定义为大于３０％的肿瘤　细胞呈现强的、完整的细胞膜着色，显然这一标准　是为了减少假阳性率而制定的。本研究目的是了　解采用新的组织微阵列技术及细胞核阵列技术　ＩＨＣ与ＦＩＳＨ的一致性，为了便于同以往发表的文　献进行对比，因此仍采用传统旧的标准。　荧光原位杂交结果判断　：ＨＥＲ一２基因检测　的探针同时含有ＨＥＲ一２基因（标记为橘红色荧　光）和该基因所在的１７号染色体着丝粒（标记绿　色荧光）序列的混合探针。杂交的组织、细胞中有　７５％的细胞核显示出双色信号时，视为试验成功。　且红、绿信号互为对照，癌与非癌细胞互为对照。　具体操作：（１）红色信号的总数与绿色信号的总　数比值≥２时，为ＨＥＲ．２基因扩增，否则为无扩　增；（２）若红、绿两信号的比值＞２０或众多信号连　接成簇时可不计算，即视为基因扩增；（３）若比值　介于１．８～２．２之间，则需要再计算２０个细胞核　中的信号或由另外一个分析者重新计数。如仍为　中华乳腺病杂志（电子版）２０１１年１０月第５卷第５期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｂｒｅａｓｔ　Ｄｉｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｏｃｔ０ｈｅｒ　２０１１．ｖ０１．５．Ｎｏ．５　・１１・　临界值，则在检测报告中注明；（４）若ＨＥＲ．２基因　扩增在不同癌细胞中存在异质性时，应在另一乳　腺癌组织区域再计算２０～３０个癌细胞核中的红、　绿信号值，报告其最大值，并加以注释；（５）在肿　瘤细胞核中仅有一个绿色信号的病例诊断为１７　表１　２４８例乳腺癌ＨＥＲ一２的ＦＩＳＨ与ＩＨＣ检测结果　号染色体单倍体；（６）红色荧光信号的总数与绿　色荧光信号的总数比值＜２且绿色荧光信号≥３　为１７号染色体多倍体型。　１．６统计学处理　统计学处理采用ＳＰＳＳ　１１．５软件，两种方法　检测结果的比较采用一致性Ｋａｐｐａ检验。以　ＦＩＳＨ检测结果为金标准，绘制１ＨＣ检测乳腺癌　ＨＥＲ一２　ＲＯＣ曲线；Ｐ＜０．０５０。有统计学意义。　２　结果　ＩＨＣ：免疫组织化学检验；ＦＩＳＨ：荧光原位杂交检验　表２两种方法检测乳腺癌ＨＥＲ．２状态一致『生分析　２．１　ＩＨＣ检测结果　２４８例乳腺癌标本中，ＩＨＣ（一）为９０例，ＩＨＣ　（＋）为４９例，ＩＨＣ（＋＋）为３７例，ＩＨＣ（＋＋＋）为　ＩＨＣ：免疫组织化学检验；ＦＩＳＨ：荧光原位杂交检验　５例为１７号染色体多倍体型，ＦＩＳＨ检测均为阴性　（红色荧光信号的总数与绿色荧光信号的总数比值　＜２且绿色荧光信号Ｉ＞３），占ＦＩＳＨ阴性总例数２．９％　（５／１７２）。　７２例。根据ＩＨＣ结果判断标准，阴性１７６例，阳　性７２例，阳性率为２９．０％（表１，图１）。　２．２　ＦＩＳＨ检测结果　２４８例乳腺癌病理标本中，ＦＩＳＨ阴性１７２例　３讨论　（图２ａ），ＦＩＳＨ阳性７６例（图２ｂ）（表１），ＦＩＳＨ阳　笔者自己研究出了细胞阵列技术（发明专利　性率为３０．６％。　号：ＺＬ　２００５　１　０１００２１６．６）并将其用于ＦＩＳＨ检　２．３　ＩＨＣ与ＦＩＳＨ的结果比较　测　Ｊ，一次可以完成１００例样本的检测，并且所用　２４８例乳腺癌ＦＩＳＨ与ＩＨＣ的检测结果见表１。　探针量与传统方法做１例检测的量相同，大大降　将ＩＨＣ（一）～（＋＋）合并后行一致性检验，Ｋａｐｐａ＝　低了检测成本。利用细胞核阵列进行ＦＩＳＨ检测，　０．７１１，Ｐ＝０．０００（表２），ＩＨＣ检测阳性者ＦＩＳＨ检测　所有病例均在同一条件下进行，可比性强，结果更　结果也趋向阳性。同时以ＦＩＳＨ检测为金标准，以　为可信。通过这种方法同样克服了利用包埋组织　ＩＨＣ为变量指标绘制ＲＯＣ曲线图，测得曲线下面　进行ＦＩＳＨ成功率低，高背景的缺点。制作细胞核　积为０。８８８，Ｐ＝０．０００，以ＩＨＣ（＋＋＋）为诊断界值，其　阵列提取细胞时利用的是整张切片，因此所分析　准确率为８７．９％（图３，表３）。通过ＩＨＣ的检测可　的细胞应该包含了多个癌浸润部位，且每个阵列　以较好的反映出ＦＩＳＨ结果。　点中细胞数可达５００个　Ｊ，可以达到ＦＩＳＨ检测的　要求。　２．４　１７号染色体单体型与多倍体型　ＩＨＣ（＋＋）中４例为ｌ７号染色体单体型，其　ＦＩＳＨ检测结果均为阳性（红色荧光信号的总数与　绿色荧光信号的总数比值ｔ＞２且绿色荧光信号＜１），　占ＦＩＳＨ阳性病例总数５．２６％（４／７６）。ＩＨＣ（＋＋＋）中　由于在本实验中采用了新的提取细胞核的方　法，并且采用了较厚的组织切片，这样可以保证完　整的细胞核占绝对优势，因此在检测ＨＥＲ一２基因　状态时可以避免假阴性的产生。　表３　ＩＨＣ检测乳腺癌ＨＥＲ一２的ＲＯＣ曲线下面积及其他指标　ＩＨＣ：免疫组织化学检验；ＦＩＳＨ：荧光原位杂交检验；Ａ：ＲＯＣ曲线下面积　・１２・　中华乳腺病杂志（电子版）２０１１年１０月第５卷第５期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｂｒｅａｓｔ　Ｄｉｓ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１１，Ｖｏ１．５，Ｎｏ．５　在进行ＨＥＲ－２免疫组织化学分子检测时采用组　检测结果，在检测过程中需排除是否为１７号染色　织微阵列组技术，使所有组织在同一条件下进行　实验，保证了实验结果的准确性　。　本实验对２４８例病理诊断为乳腺癌的组织分　别行ＩＨＣ和ＦＩＳＨ检测，两种方法检测的结果进　行一致性检验得出的结果：Ｋａｐｐａ＝０．７１１，Ｐ＝　０．０００。ＩＨＣ（＋＋＋）共７２例，其中有５９例ＦＩＳＨ为　阳性，说明大多数ＨＥＲ．２蛋白过度表达的肿瘤，　其ＨＥＲ一２基因存在扩增。有１３例ＩＨＣ（＋＋＋）而　ＦＩＳＨ阴性的病例，文献报道这类患者预后与ＩＨＣ　阳性患者相近似，但没有明确提出是否应用靶向　药物治疗¨　。分析除了基因扩增外，还可能存在　转录和翻译水平的调控，导致ＨＥＲ一２蛋白过度表　达，另外肿瘤对靶向药物的敏感性同时还受到肿　机体免疫机能等条件的影响　。　在ＦＩＳＨ阳性结果病例中８例ＩＨＣ（一～＋），　占ＦＩＳＨ阳性结果总数的１０．５％（８／７６），与文献　报道的比率相符　。观察ＦＩＳＨ染色切片并计数　细胞核红色荧光信号，均在４～８之间。提示这部　分患者为基因低水平扩增。以ＦＩＳＨ检测结果为　金标准，ＩＨＣ检测的ＲＯＣ分析显示，曲线下面积　为０．８８８，Ｐ＝０．０００；以ＩＨＣ（＋＋＋）为诊断界值，其　准确率是８７．９％。这说明通过ＩＨＣ的检测可以　较好的反映出ＦＩＳＨ的结果。　体单倍体。　（本文图１～３见光盘）　参考文献　［１］Ｙｏｓｈｉｄａ　Ｎ，Ｏｍｏｔｏ　Ｙ，Ｉｎｏｕｅ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｗｉｔｈ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｃｉ，２００４，９５　（６）：４９６－５０２．　［２］Ｐａｒｋｉｎ　ＤＭ，Ｂｒａｙ　Ｆ，Ｆｅｒｌａｙ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｇｌｏｂａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，　２００２［Ｊ］．ＣＡ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｊ　Ｃｌｉｎ，２００５，５５（２）：７４．１０８．　［３］Ｐａｉｋ　Ｓ，Ｋｉｍ　Ｃ，Ｗｏｌｍａｒｋ　Ｎ．ＨＥＲ２　ｓｔａｔｕｓ　ａｎｄ　ｂｅｎｅｆｉｔ　ｆｒｏｍ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ　ｉｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ　Ｍｅｄ，　２００８，３５８：１４０９－１４１１．　［４］Ｈａｎｎａ　Ｗ，Ｋａｈｎ　ＨＪ，Ｔｒｕｄｅａｕ　Ｍ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＥＲ－２／ｎｅｕ　（ｅｒｂＢ－２）ｓｔａｔｕｓ　ｉｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ：ｆｒｏｍ　ｂｅｎｃｈ　ｔｏ　ｂｅｄｓｉｄｅ［Ｊ］．　Ｍｏｄ　Ｐａｔｈｏｌ，１９９９，１２（８）：８２７．８３４．　［５］Ｓｌｏｄｋｏｗｓｋａ　Ｊ，Ｆｉｌａｓ　Ｖ，Ｂｕｓｚｋｉｅｗｉｃｚ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　Ｈｅｒ２／ｎｅｕ　ａｎｄ　ｈｏｒｍｏｎａｌ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｓｔａｔｕｓ　ａｓｓｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ａｕｔｏｍａｔｅｄ　ｉｍａｇｅｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｙｓｔｅｍｓ：ＡＣＩＳ　ＩＩＩ（Ｄａｋｏ）ａｎｄ　ＳｃａｎＳｃｏｐｅ（Ａｐｅｆｉｏ）［Ｊ］．Ｆｏｌｉａ　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ　Ｃｙｔｏｂｉｏｌ，２０１０，　４８（１）：１９—２５．　［６］Ｊｉａｎｇ　ＦＩＴ，Ｚｈａｎｇ　ＳＱ，Ｚｈａｏ　Ｔ．Ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｍａｋｅ　ｎｕｃｌｅｉ　ｏｒ　ｃｅｌｌ　ｍｉｅｒｏａｎ＇ａｙｓ［Ｊ］．Ｄｉａｇｎ　Ｍｏｌ　Ｐａｔｈｏｌ，２００６，１５（２）：１０９—１１４．　［７］Ｊｉａｎｇ　ＨＹ，Ｚｈａｎｇ　ＸＦ，Ｌｉｕ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｒｒａｙ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｈｉｇｈ—ｔｈｒｏｕｇｈ　ｐｕｔ　ｔｉｓｓｕｅ　ｍｉｅｒｏａｒｒａｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ：　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ　ｇｒｏｕｐｓ［Ｊ］．Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅｌｌ　Ｄｅｖ　Ｂｉｏｌ　Ａｎｉｍ，２００７，　４３（３／４）：１０９－１ｌ２．　本组１７号染色体单体型病例ＦＩＳＨ染色均是　阳性，文献报道这类患者与整倍体ＦＩＳＨ阳性患者　的预后明显不同，对靶向药物治疗不敏感　。提　示当ＩＨＣ（＋＋）时有必要进行ＦＩＳＨ检测来评价　ＨＥＲ一２基因状态。认为１７号染色体单体型的细　胞核内红绿荧光信号比值大于２，但是每个细胞　核内红色信号绝对数小于整倍体，导致ＨＥＲ一２基　因在转录、翻译水平上低于整倍体ＦＩＳＨ阳性病　例，可能出现乳腺癌细胞膜ＨＥＲ一２蛋白表达较　低，而致ＩＨＣ染色弱阳性或阴性可能。另外，１７　号染色体单体型染色体本身是个畸变染色体，可　能是乳腺癌ＨＥＲ一２基因一个特殊亚型，因而有不　同的预后。　ＩＨＣ检测方法与ＦＩＳＨ检测方法是通过两个　不同途径来检测乳腺癌细胞ＨＥＲ－２蛋白表达和　ＨＥＲ－２基因状态，ＦＩＳＨ检测虽精确、稳定，但试剂　昂贵、要求条件苛刻，主要反映细胞遗传信息；而　ＩＨＣ检测敏感、试剂相对廉价，主要反映细胞功能　状态。目前许多学者过于看重ＦＩＳＨ检测方法。　本实验证明ＩＨＣ检测结果能够较好地反映ＦＩＳＨ　［８］　Ｍａｓｓ　ＲＤ，Ｐｒｅｓｓ　ＭＦ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｏｕｔｃｏｍｅｓ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ＨＥＲ２　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｗｏｍｅｎ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ．Ｃｌｉｎ　Ｂｒｅａｓｔ　Ｃａｎｃｅｒ，２００５，６（３）：２４０－２４６．　［９］Ｈｉｃｋｓ　ＤＧ，Ｔｕｂｂｓ　ＲＲ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＨＥＲ２　ｓｔａｔｕｓ　ｉｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｂｙ　ｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｆｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：ａ　ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　ｒｅｖｉｅｗ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｅｒｐｒｅｔｉｖｅ　ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｐａｔｈｏｌ，２００５，３６（３）：　２５０－２６１．　［１０］Ｄｅａｎ　Ｃｏｌｏｍｂ　Ｗ，Ｅｓｔｅｖａ　ＦＪ．Ｈｅｒ２一ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ：　ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ　ａｎｄ　ｂｅｙｏｎｄ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２００８，４４（１８）：　２８０６－２８１２．　［１１］Ｐａｒｋ　Ｓ，Ｊｉａｎｇ　ｚ，Ｍｏｒｔｅｎｓｏｎ　ＥＤ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｎｔｉ－ＨＥＲ２／ｎｅｕ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｄｅｐｅｎｄｓ　ｏｎ　ｂｏｔｈ　ｉｎｎａｔｅ　ａｎｄ　ａｄａｐｔｉｖｅ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｌ，２０１０，１８（２）：１６０—１７０．　［１２］０’Ｍａｌｌｅｙ　ＦＰ，Ｔｈｏｍｓｏｎ　Ｔ，Ｊｕｌｉａｎ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．ＨＥＲ２　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｉｎ　ａ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ—ｂａｓｅｄ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｐａｔｈｏｌ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，２００８，　１３２（１）：６１－６５．　［１３］Ｒｉｓｉｏ　Ｍ，Ｃａｓｏｒｚｏ　Ｌ，Ｒｅｄａｎａ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．ＨＥＲ２　ｇｅｎｅ－ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒｓ　ｗｉｔｈ　ｍｏｎｏｓｏｍｙ　ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　１７　ａｒｅ　ｐｏｏｒｌｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｔｏ　ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ－ｂａｓｅｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌ　Ｒｅｐ，　２００５，１３（２）：３０５—３０９．　（收稿日期：２０１１－０１—２６）　（本文编辑：赵彬）　蒋会勇，马永权，张雪峰．微阵列技术用于检测乳腺癌人表皮生长因子受体２基因状态［Ｊ／ＣＤ］．中华乳腺病杂志：电　子版，２０１１，５（４）：５２５—５３３．