肾 活 检 冰 冻 切 片 免 疫 荧 光 染 色
( 直 接 法 )
一. 试剂
1.冷冻包埋剂OCT
2.荧光抗体:IgG-FITC,IgA-FITC,IgM-FITC,C3-FITC,C4-FITC,C1q-FITC,
Fg-FITC。均用抗体稀释液进行1:100稀释。
二.取材
1.准备冷冻头(标号并预先包埋少量OCT)、纱布(生理盐水浸湿)、冰块
2.活检标本取出后,立即放入装有纱布的Tip管中,置冰块上送回实验室
3.组织立即置冷冻好的冷冻头上,再包埋少量OCT,恒冷切片机内制作冰冻切片(切片厚度为3um),用蒸馏水冲洗掉切片上的OCT;加稀释好的抗体,避光,湿盒内4℃过夜;蒸馏水洗2分钟×3次; 荧光显微镜观察结果
三. 注意事项:
1. 取材后标本须快速冷冻
2. 切片温度需适宜,不宜过高或过低
3. 染色过程中必须防止切片干燥,严格避光
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