超声波提取植物总黄酮

--超声波提取植物总黄酮

一、实验目的

为充分利用天然植物资源，避免资源的浪费，探讨植物总黄酮的提取及鉴别方法 。

二、实验原理

采用超声波乙醇浸提法从植物材料（黄芩、银杏叶、枇杷叶）中提取黄酮类物质，并用分光光度法测定含量。利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。 三、实验材料

原料：黄芩、银杏叶、枇杷叶

试剂：95%乙醇AR；无水乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；

芦丁标准品、蒸馏水

其它：滤纸、吸管、容量瓶、漏斗、试管 四、实验仪器

超声波清洗器（超声工作频率40kHz）； 紫外可见分光光度计； 抽滤机 电炉子 水浴锅 五、实验步骤 （一）试剂配制

a.硝酸铝（10%）：称取20 g硝酸铝溶于蒸馏水中，定容至200 mL，混匀，贴标签备用。

b.亚硝酸钠（5%）：称取10 g亚硝酸钠溶于蒸馏水中，定容至200 mL，混匀，贴标签备用。

c.芦丁标准溶液（2 mg/ml）：称取芦丁2 g于1000 mL容量瓶中，加蒸馏 水溶解并定容至刻度，混匀，贴标签备用。 d.乙醇溶液（60%）：600ml无水乙醇，溶于蒸馏水，定容至1000 ml容量瓶中，混匀，贴标签备用。

e.氢氧化钠溶液（4%）：40 g氢氧化钠溶于水，定容至1000 ml容量瓶中，混 匀，贴标签备用。 （二）总黄酮成分提取

取干燥植物材料（黄芩、银杏叶、香樟叶），粉碎。称取约5 g，加80 ml 95%乙醇，浸泡20min，超声波提取30 min，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，浸泡20min，再次超声波提取30 min，抽滤，合并两次滤液，减压回收（水浴加热）乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，

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得样品液。

（三）定量实验-总黄酮的含量测定

1. 波长的选择

取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。 2. 标准曲线的绘制

分别精密吸取芦丁对照液（2 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.40 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.40 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度。

管号 芦丁 亚硝酸钠 硝酸铝 氢氧化钠 60%乙醇 浓度

1 0.00 0.40 0.40 4.00 5.20 0.00

2 0.50 0.40 0.40 4.00 4.70 0.10

3 1.00 0.40 0.40 4.00 4.20 0.20

4 2.00 0.40 0.40 4.00 3.20 0.40

5 3.00 0.40 0.40 4.00 2.20 0.60

6 4.00 0.40 0.40 4.00 1.20 0.80

7 5.00 0.40 0.40 4.00 0.20 1.00

3. 提取物含量的测定

精密吸取样品液1 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法，测定其吸光度A，用标准曲线法计算样品中总黄酮的含量（mg/ml）。

管号 样品液 亚硝酸钠 硝酸铝 氢氧化钠 60%乙醇 1 0.00 0.40 0.40 4.00 5.20 黄芩1 1.00 0.40 0.40 4.00 4.20 黄芩2 1.00 0.40 0.40 4.00 4.20 银杏1 1.00 0.40 0.40 4.00 4.20 银杏2 1.00 0.40 0.40 4.00 4.20 香樟1 1.00 0.40 0.40 4.00 4.20 香樟2 1.00 0.40 0.40 4.00 4.20 六、实验讨论

利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的。此过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应，被浸提的生物活性物质在一定时间内保持不变。。 七、思考题

1、黄酮类化合物的生理作用？

2、在本实验中，哪些因素会影响测定结果？

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