采静脉血时止血带结扎过久，可引起误差，不宜超过1min。如以结扎1min的
第一：压脉带不可结扎过久
样品结果为基数，结扎3min，可使血浆总蛋白增加5％，胆固醇增加5％，铁增加6％，胆红素增加8％，乳酸则不能使用止血带。
（2）血清标本应避免溶血。许多物质红细胞内和血清中（血浆）的含量是不
第二：血清标本应避免溶血
一样的。如ALT红细胞内比血清高出数倍。血钾、AST高出几十倍，而HDH则高出百倍以上。
（3）注意采血不能在输液的同侧进行，更应杜绝在输液管内采血，因输液成分
第三:不可在输液同侧及输液管内采血
会影响检测结果（使相应的结果偏高，如输K+、Glu时，可使所测K+、Glu明显增高）。
（4）标本采集后，必须在试管或容器
第四：采血管上标明信息
上帖上检验申请单号码、住院病人应有床号、姓名，且应当场核对无误。
第五:注意采血顺序
（5）采血顺序：血培养→血凝管→血常规管→生化及其他管→血沉管。
考点二：简述静脉采血的操作步骤
找穿刺点：距穿刺点上方约6～10cm处系止血带，嘱咐患者握拳，再次选择穿刺部位→消毒：由内而外，直径约为5cm→穿
第一步：穿刺
刺：左手夹一棉签，嘱咐患者握拳，左手绷紧皮肤，右手持穿刺针，持针的角度为30°，进行穿刺，当穿刺针头进入血管内，见到回血后，固定穿刺针，将穿刺针的另一端刺塞针插入真空采血管内
第二步：采血
按检验项目的要求顺序抽取所需血量→须按要求混均的采血管，要颠倒混均6～8次
第三步：拔针
松开止血带，同时嘱患者松拳→用棉签按压穿刺点，迅速拔针
考点三：如何避免抽血时发现溶血现象（1）注射器试管均需干燥无水分
（2）止血带不可扎得过久，不使局部组织损伤（3）抽血时不可过快
（4）抗凝剂和血液的比例适当，混匀动作轻（5）使用注射器采血时沿管壁缓慢注入试管（6）分离血清时，不可用外物外力剧烈拨动血液
考点四：简述血涂片的制备过程第一步：操作前准备
载玻片，推片，EDTA-K2抗凝全血，一次性微量吸管距载玻片一端约1cm处加一滴血→左手执载玻片，右手
第二步：操作过程
持推片两侧接触血液，使血液沿推片边缘展开→将推片与载玻片呈30~45°角，均匀迅速向载玻片另一端推开（1）血涂片标准应该是厚薄适宜，头体尾分明，细胞分布均匀，两侧留有一定空隙。
（2）血滴大，推片速度快，角度越大，血膜越厚，该推
第三步：注意事项
片适用于贫血患者和观察寄生虫及微丝蚴；
（3）血滴小，推片速度慢，角度小，血膜越薄，该推片适用于血细胞比容增高的患者；
（4）注意载玻片要清洁，推片边缘应光滑。
考点五：中性粒细胞病理性增多的临床意义（1）急性感染
（2）严重的损伤或大量血细胞破坏（3）急性大出血（4）急性中毒（5）肿瘤性增多
考点六：嗜酸性粒细胞病理性增多的临床意义（1）过敏性疾患
如在支气管哮喘、血管神经性水肿、食物过敏、血清病时均可见血中嗜酸性粒细胞增多。
（2）某些传染病
一般急性传染病时，血中嗜酸性粒细胞均减少，唯猩红热时反而增高。
此时嗜酸性粒细胞常可高达10%以上，并可见有幼
（3）慢性粒细胞性白血病
稚型。某些恶性肿瘤，特别是淋巴系统恶性疾病。如霍奇金病及某些上皮系统肿瘤如肺癌时，均可见嗜酸性粒细胞增多，一般在10%左右。
考点七：简述Rivalta试验/李凡他实验的操作方法第一：操作前的准备
100ml量筒，蒸馏水，冰醋酸，浆膜腔穿刺液
（1）在100ml的量筒内装入100ml的蒸馏水，在水表
第二：操作步骤
面滴加2滴冰醋酸，再滴入1～2滴浆膜腔穿刺液。（2）看有否白色云雾状混浊下降到50ml刻度以下。如是则为阳性。
（1）临床上ー般用于鉴别胸水及腹水是否炎症的一项常规检查。
（2）阳性（＋）表示积液为渗出液，渗出液由炎症引
第三：临床意义
起，常见于感染性、非感染性因素，有时可见。（3）阴性（－）表示积液为漏出液，漏出液属非炎症性，基本形成原因为：血浆胶体渗透压降低，血管内压力増高，淋巴管阻塞等。
考点八：简述阴道分泌物的操作步骤第一：操作前准备
显微镜，0.9%生理盐水，玻片，标本（阴道分泌物）（1）将采集标本的拭子直接涂在滴有盐水的载玻片上，盖上玻片。
第二：操作步骤
（2）用低倍镜观察有无阴道毛滴虫、念珠菌菌丝等。（3）再用高倍镜观察白细胞、上皮细胞、杆菌、球菌的多少，并寻找有无念珠菌菌体及孢子，必要时进一步染色观察。
（1）注意取分泌物前24～48h避免性交、阴道灌洗或局部用药，取分泌物时窥器不涂润滑剂，分泌物取出后应及时送检。
第三：注意事项
（2）若怀疑滴虫，应注意保暖，尤其冬日，否则滴虫活动力减弱，造成辨认困难。
（3）所用玻片须洁净，生理盐水新鲜，标本应避免污染，涂片应均匀，对可疑阳性标本与临床诊断不符时应复查。
考点九：简述尿沉渣镜检的基本步骤第一步：操作前准备
显微镜，载玻片，离心机，刻度离心管
（1）取刻度离心管，倒入新鲜尿液10m1，混合后以1500转／分离心5分钟。
第二步：操作步骤
（2）取出离心管，弃去上清液，留下0．2m1沉渣，轻轻摇动离心管，使尿沉渣有形成分充分混匀。（3）取尿沉渣0．2m1于载玻片上镜检观察结果。（1）最好取晨尿在1h内检查。（2）一般应留取中段尿。
（3）镜检时光线要适宜，光线过强可使透明管型漏检。（4）镜下发现红细胞，应进一步作形态分类，以鉴别肾小球性及非肾小球性血尿。
（5）计数时要注意有无其他异常巨大细胞、寄生虫虫卵、
第三步：注意事项细菌、滴虫、粘液丝等，男性标本还要注意有无精子及卵磷脂小体等。
（6）染色时间要恰当，染色时间过久可引起淡染细胞向浓染细胞转化，有碍识别。
（7）胆红素尿时，有形成分可被当成黄色，掩盖其真实的颜色，应注意区分。
（8）采集标本后应在1h之内完成检查，否则可将标本加甲醛并置4℃保存。
考点十：简述交叉配血的操作过程
离心机，生理盐水（0．9％氯化钠注射液），EDTA-K2
第一步：操作前准备
抗凝全血，试管
（1）将受血者与献血者的红细胞血清分离，分别配制受血者与献血者红细胞配成2％盐水悬液。
（2）取洁净小试管2支，1支标明主侧：受血者血清（PS）
第二步：操作步骤
＋供血者细胞（DC）；另1支标明次侧：供血者血清（DS）＋受血者细胞（PC）。
（3）按标记主侧管加受血者血清1滴和供血者红细胞悬液1滴，次侧管加供血者血清1滴和受血者红细胞悬液1滴→混匀，以1000r/min离心1min，轻轻侧动试管，观察结果。
第三步：结果判读
“主侧”和“次测”均无溶血及凝集，表示无输血禁忌，可以输血，反之不能。
（1）严格三查三对，遵守操作规程。
（2）标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血，血液凝固等不能测定。
（3）不能单独应用盐水介质交又配血进行临床发血，必须结合其他介质方法交叉配血相合后方可发血。
第四步：注意事项（4）试剂使用前应仔细检查试剂的贮存条件是否符合要求、是否变质失效。
（5）注意交又配血试验过程中离心力、温度、红细胞浓度、抗原抗体的比例。
（6）交又配血试验血样，要求是输血前3天内的血样。（7）标本血液离体后要求尽快送检，至检测完毕最长不能超过3d，每次检测后受血者和供血者的血标本应在2℃～8℃保存7天。
考点十一：简述ABO血型鉴定正反不一致的原因
①病人信息张冠李戴②结果误判
③登记过程中出现错误
第一：人为因素
④离心时间及速度不够或过久过大⑤使用污染的试管⑥忽视溶血现象
⑦配置红细胞悬液过浓或过淡
第二：试剂因素
①试剂失效（开启时间过长）②试剂污染
①老年人、婴儿抗体水平弱
②红细胞表面抗原位点过少（如白血病和恶性肿瘤等）
第三：标本因素
③细菌感染或疾病因素导致红细胞自凝现象
考点十二：简述血库发血的注意事项第一：认真执行查对制度第二：认真检查血液质量
第三：发血人与取血人共同执行三查三对，并签名登记
考点十三：简述革兰染色的操作步骤
第一步：操作前准载玻片，细菌标本（单个菌落），生理盐水，接种环备
（1）制片：取生理盐水一滴，置玻片上，用接种环挑取菌落，将细菌放在生理盐水内研匀成薄的菌膜后，自然干燥，并经火焰固定。
第二步：操作步骤
（2）染色：
①初染加结晶紫染于涂片上，染1min后，用水洗去染液。②媒染加碘液染1min，水洗。
③脱色加95％乙醇，不时摇动约30s，至无紫色脱落为止，水洗。
④复染加稀释石炭酸复红染30s，水洗，干后镜检。（1）注意涂片切不可过于浓厚。
第三步：注意事项
（2）火焰固定，固定时通过火焰1-2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（3）注意染色时间，脱色时间不宜过长
考点十四：简述抗酸染色的操作步骤
第一步：操作前准备干净的载玻片，细菌标本
（1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2~3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离
第二步：操作步骤
开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3~5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
（2）脱色：5％盐酸酒精脱色30秒~1分钟用水冲洗。（3）复染：用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。
第三步：注意事项
（1）如是液体标本（如胸腹水、脑脊液等）要离心取沉渣进行涂片
（2）注意染色时间，脱色时间不宜过久
考点十五：简述ELISA操作的注意事项
在ELISA中除了包被外，一般需进行4～5次加样。应该使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求准确。一：加样
标本和结合物的稀释液应按规定配制。加样时应将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出现气泡。ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加结合物后，此时反应的温度和时间应按规定的要求，保温容器最好是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在
二：孵育
一起。为避免蒸发，板上应加盖，或将平板放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒应该是金属的，传热容易。如用保温箱，空湿盒应预先放在其中，以平衡温度，这一步骤在室温较低时更为重要。加入底物后，反应时间和温度通常不做严格要求。
洗涤在ELISA过程中虽不是反应步骤，但却是决定成败的
三：洗涤
关键。洗涤的目的是洗去反应中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。
四：显色及终止反应
显色是酶促反应，应按规定的温度和时间操作，用酸终止。
五：结果判读
用比色计测定结果，准确性决定于ELISA板底的平整与透明度和比色计的质量。
考点十六：简述双抗体夹心法的操作步骤
（1）特性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。（2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。（3）加酶抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量呈正相关。
（4）加底物：夹心复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
考点十七：简述OGTT实验操作注意事项主要适应证：
（1）无糖尿病症状，随机或空腹血糖异常者。（2）无糖尿病症状，有一过性或持续性糖尿。（3）无糖尿病症状，但有明显糖尿病家族史。
（4）有糖尿病症状，但随机或空腹血糖不够诊断标准。（5）妊娠期、甲状腺功能亢进、肝病或感染，出现糖尿者。（6）分娩巨大胎儿的妇女或有巨大胎儿史的个体。（7）不明原因的肾病或视网膜病。注意事项：
（1）整个试验中不可吸烟、喝咖啡、喝茶或进食。（2）儿童给予葡萄糖量为0.75g/kg体重。
（3）糖耐量试验可反映近期体内糖代谢的情况，但受许多因素影响。
（4）对于胃肠道手术或胃肠功能紊乱影响糖吸收的患者，糖耐量试验不宜口服进行，而需采用静脉葡萄糖耐量试验（IGTT）。对OGTT正常但有糖尿病家族史者，可进行可的松OGTT，但50岁以上者对葡萄糖的耐受力有下降的趋势，所以不宜做此类试验。
考点十八：简述PCR技术的基本原理和反应步骤
以需要扩增的DNA为模板，以一对分别与模板的5’和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复
基本原理
制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。
①变性：将反应系统加热至95℃，使模板DNA全部变性变成单链DNA。②退火：将温度下降至适当温度，使引物与模板DNA退火结合。
基本步骤
③延伸：将温度升至72℃，DNA聚合酶以DNTP底物催化DNA的合成
反应。上述三个步骤称为一个循环，这样的循环重复25～30次，就可以得到大量的目标DNA。
考点十九：简述骨髓象检查的方法及步骤
①取材、涂片、染色情况：采用“良好”、“尚可”、“欠佳”等标准进行评价。
②判定骨髓有核细胞增生程度：有核细胞与成熟红细胞之比，分五级：增生极度活跃：1：1
一：低倍镜检查
增生明显活跃：1：10增生活跃：1：20增生减低：1：50增生极度减低：1：200
③观察涂片尾部及边缘有无大的或成群（团）的异常细胞，同时计数全片巨核细胞。
①选择部位：在涂片体、尾交界处，选择细胞分布比较均匀处。
②有核细胞分类计数：可根据增生程度确定分类。
③观察细胞形态：
二、油镜观察
粒系：中毒颗粒、空泡、有无巨幼变粒细胞、Aure小体等。
红系：幼红细胞及成熟红细胞有无异常变化。巨核系：小巨核、幼巨产板、巨大血小板、估计血小板量。
④注意有无寄生虫。
⑤判定低倍镜下观察到的异常细胞性质。①根据分类结果计算出各系统及各阶段细胞的
三、计算结果
百分率。
②计算粒红比值：粒细胞系总和/红细胞系总和。
①根据骨髓象分类结果，按报告单要求逐项进行
四、填写报告
填写。
②做好骨髓象所见的形态特征描述。
①取材、涂片、染色情况：良好、尚可、欠佳。②骨髓增生程度，粒：红=？：？。③粒系：④红系：
⑤淋巴系或单核系：
五、骨髓报告分析及意见
⑥全片巨核细胞数，根据血小板分布估计其量是多、正常、少。⑦有无寄生虫。
⑧血片分类及所见进行描述。
⑨写出诊断意见：根据血象、骨髓象和细胞化学染色所见，结合临床资料，提出具体诊断意见或供参考的意见。
考点二十：实验室失控后的处理措施
此步主要是用以查明人为误差，每一步都认真仔细的操
（1）立即重新测定同作，以查明失控的原因；另外，这一步还可以查出偶然一控制物
误差，如是偶然误差，则重测的结果应在允许范围内（在控）。如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下一步操作。
（2）新开一瓶质控如果新开的质控血清结果正常，那么原来那瓶质控血清品，重测失控项目
可能过期或在室温放置时间过长而变质，或者被污染。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。
（3）新开另一批质控如果结果在控，说明前一批血清可能都有问题，检查它品，重测失控项目
们的有效期和贮存环境，以查明问题所在。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。
（4）进行仪器维护，检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需
重测失控项目要清洗或更换，对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。
（5）重新校准，重测修正患者样本检测结果,回收检测报告,报告组长和/或失控项目。
主任,登记备案，同时用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。
（6）请专家帮助
如果前五步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援了。
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