SDS-PAGE凝胶配方及制胶

12%分离胶 试剂 体积 5ml 8ml 10ml 15ml 25ml 3.2 4 6 10 30ml 60ml 12 24 90ml 36 22.5 29.7 900 900 54

120ml 48 30 39.6 1200 1200 72

30%Acr-Bis（ml） 2 1.5M Tris-HCl PH8.8（ml） ddH2O（ml） 10%SDS（ul） 10%APS（ul） TEMED（ul）

1.25 2 2.5 3.75 6.25 7.5 15 9.9 19.8 300 600 300 600 18

36

1.65 2.64 3.3 4.95 8.25 50 50 3

80 80 100 150 250 100 150 250 9

15

4.8 6

5%浓缩胶 试剂 体积 4ml 6ml 8ml 12ml 16ml 20ml 24ml 3.3 3.96 2.5 3 36ml 5.94 4.5 48ml 7.92 6 30%Acr-Bis（ml） 0.66 0.99 1.32 1.98 2.64 1M Tris-HCl PH6.8（ml） ddH2O（ml） 10%SDS（ul） 10%APS（ul） TEMED（ul）

1、按顺序加溶液，每加完一个溶液摇匀一下。

0.5 0.75 1 1.5 2 2.74 4.14 5.48 8.28 11.02 13.7 16.56 24.84 33.12 40 40 4 60 60 6 80 80 8 120 160 120 160 12 16 200 240 200 240 20 24 360 360 36 480 480 48 2、TEMED要在通风橱中加，加入后混匀30秒左右后再注胶；吸打时枪头不出液面，以减少气泡 3、分离胶配好后要用水封顶，聚合至少40min（也可聚合一夜）

4、加入浓缩胶后插梳子（要洗干净），梳子倾斜插入，避免产生气泡。聚合0.5-1h（若不用可先泡在电极液中，第二天再用），拔梳子时要尽量避免拔歪 5、电泳条件：大胶 500V，15mA/板 9h左右

小胶 500V，15mA/板 1.5-2h左右

（电流根据时间来定，用新电极液时，时间会缩短，此外溴酚蓝条带过了浓缩胶后，可适当加大电流）

10% 2块大板 30%Arc-Bis 1.5M Tris-Hcl(pH8.8) 分离胶 ddH2O 10%SDS 10%APS TEMED 24.448 mL 16.8 mL 27.367 mL 672μl 504μl 25.2μl 5% 2块大板（15mL） 30%Arc-Bis 1.0M Tris-Hcl(pH6.8) 浓缩胶 ddH2O 10%SDS 10%APS TEMED 10.143mL 147μl 132.3μl 13.23μl 2.4255mL 1.837 mL