蒺藜皂苷提取工艺的初步研究

解放军药学学报２０１０年６月２０日第２６卷第３期Ｐ　。　Ｊ　ＣｈｉｎＰＬＡ，ＶＯ１．２６，ＮＯ．３，Ｊｕｎ　２０，２０１０　蒺藜皂苷提取工艺的初步研究　谢彦兵　，熊学敏　［摘要］　目的研究蒺藜皂苷的提取工艺并对其进行优化选择，为其相关药品的工业生产提供一定的参考。方法　最佳提取工艺条件为Ａ　Ｂ，Ｃ　。即　通过正交试验以优化选择蒺藜皂苷的提取工艺，并以呋甾皂苷含量作为衡量指标。结果用４倍量的９０％乙醇回流提取２次，每次１　ｈ。结论［中图分类号］　Ｒ９４３　［文献标志码］　Ａ　本试验可为蒺藜的进一步研究和资源开发利用提供参考。　［文章编号］　１００８－９９２６（２０１０）０３－０２２５－０２　［关键词］蒺藜；皂苷；呋甾皂苷；正交试验；提取工艺　［ＤＯＩ］　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－９９２６．２０１０．０３．０１２　Ａ　Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｔｒｉｂｕｌｕｓ　Ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　ＸＩＥ　Ｙａｎ．ｂｉｎｇ①ＸＩＯＮＧ　Ｘｕｅ—ｍｉｎ②　．①Ｎｏ１８４　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ＰＬＡ，Ｙｉｎｇｔａｎ　３３５０００，Ｃｈｉｎａ；　．②Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ＭｅｄｉｃｉｎｅＮａｎｃｈａｎｇ　３３１３０７７，Ｃｈｉｎａ　，［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ａｎｄ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｒｉｂｕｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｓｔｉｒｓ　ａｎｄ　ｔｏ　ｏｆｆｅｒ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｄｒｕｇ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｔｒｉｂｕｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｕｒｏｓｔａｎｏｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｗａｓ　Ａ１　Ｂ３Ｃ１，ｎａｍｅｌｙ，９０％ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｆｏｕｒ　ｔｉｍｅｓ　ｔｈｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　Ｔｒｉｂｕｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｅｘ—　ｔｒａｃｔｉｏｎ，ｏｎｅ　ｈｏｕｒ　ｆｏｒ　ｅａｃｈ　ｔｉｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｉｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｃａｎ　ｓｅｒｖｅ　ａｓ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ａｎｄ　ｕｓｅ　ｏｆ　Ｔｒｉｂｕｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｔｒｉｂｕｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｓｔｕｉｓ；ｓａｐｉｎｉｎ；ｆｕｒｏｓｔａｎｏｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ；ｏ￣ｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　随着社会的不断发展，人们生活节奏的加快，心脑　血管疾病的患病率亦呈攀升之势；该病大大降低了患　者的生活质量，已成为世界范围内严重危害人们身体　健康的主要疾病之一。蒺藜为蒺藜科植物蒺藜　Ｔｒｉｂｕｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．的干燥成熟果实。性辛、味苦，微　系列电子天平（中国江苏常熟长青仪器仪表厂）；ＡＬ－　２０４电子天平［梅特勒．托利多仪器（上海）有限公司］；　１０１．１型电热恒温干燥箱（上海飞达机械仪器厂）；ＵＶ一　２４５０紫外分析仪（日本岛津制作所）。　１．２材料蒺藜（经江西省中医药研究院中药所鉴定　为蒺藜科植物蒺藜Ｔｒｉｂｕｌｕｓ　ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．的干燥成熟果　实，江西远健药业提供）；蒺藜对照药材（中国药品生物　制品检定所）；薄层层析硅胶（青岛海洋化工有限公　司）；氯化钴（上海一心试剂厂）；改良对二甲氨基苯甲　醛试剂（对二甲氨基苯甲醛１　ｇ，浓盐酸３４　ｒｎ１，甲醇１００　温；有小毒，归肝经。功用平肝解郁，活血祛风，明目，　止痒。主治头痛眩晕，胸胁胀痛，乳闭乳痈，目赤翳障，　风疹瘙痒。而主含蒺藜甾体皂苷的心脑舒通系列药物　用于预防与治疗动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病，　疗效明显；且在临床应用中的不良反应少见，无严重不　良反应　Ｊ。为了提高药品质量，本研究通过正交试验　设计，以呋甾皂苷含量为指标，优化蒺藜皂苷提取工　艺，为工业生产合理ｆ　受质量的可控性提供依据。　１仪器与材料　ｍ１）；蒸馏水（制法：采用石英管加热的硬质玻璃蒸馏水　器制得）；Ｄ．１０１大孔吸附树脂（上海振光树脂厂）；其余　所用试剂均为分析纯。　２方法与结果　１．１仪器ＨＨ－６数显恒温水浴锅（常州澳森电器有　２．１　紫外分光光度法测皂苷含量　精密称取氯化　限公司）；显色加热器（武汉药科新技术开发公司）；ＤＬ　作者简介：谢彦兵，主管药师。研究方向：ｌ晦床药学。Ｔｅｌ：（０７０１）６４３６９７９　作者单位：①３３５０００江西鹰潭，解放军第一八四医院药械科；②　３３００＂／７江西南昌，江西省中医药研究院中药所　钴（分析纯ＣｏＣ１　Ｈ：０）５００　ｍｇ，置２５　ｒｎｌ量瓶中，加水　溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。精密称取样品１００　ｍｇ，置２５　ＨＩｌ量瓶中，加甲醇２５　ｍｌ，超声３０　ｍｉｎ溶解，　冷至室温，定容，摇匀；精密吸取续滤液２　ｍｌ至１０　ＩＩｌｌ　具塞刻度试管中，加３　ｒｎｌ甲醇，加５　ｍｌ改良对二甲氨　星蕉　学报２０１０年６月２０日第２６卷第３期　口ｍ　ＪＣｈｉｎＰＬＡ，ＶＯＩ．２６，ＮＯ．３，Ｊｕｎ　２０，２０１０　表３方差分析　方差来源离均差平方和自由度　方差　Ａ　Ｂ　基苯甲醛，摇匀，密塞，于５８℃水浴保温２　ｈ后，取出，　立即放人冰水浴冷却；以甲醇代替样品同样处理，所　得溶液作为空白，照分光光度法于５１５　ｎｍ处测定吸　光度（Ａ　）。另以水作空白，于５１５　ｎｍ波长处测定吸　光度（Ａ　），按下式计算呋甾皂苷百分含量：　呋甾皂苷含量（％）＝　×　Ｒ×０．００９３／ＡＲ×ｗｓ×　Ｆ值　显著性　１４．２７　Ｐ＜０．０５　１７．８５　Ｐ＜０．０５　１７．１２　２１．４２　２　２　８．５６　１０．７１　Ｃ　４１．２２　２　２０．６ｌ　３４．３５　Ｐ＜Ｏ．０１　ｏ１（２．２）　注：Ｆ　０９９．００；Ｆ　０ｏ５（２，２）　１９．００；Ｆ　０　１（２２）　９．００　．，方差分析显示，各因素对蒺藜皂苷提取效果的　影响程度由大到小依次为Ｃ＞Ｂ＞Ａ，最佳提取工艺　条件为Ａ，Ｂ，Ｃ。，即用４倍量的９０％乙醇回流提取２　其中，Ａ　为供试品吸收度，Ａ　为氯化钴溶液的　吸收度，ｗ　为供试品重量，ｗ　为氯化钴重量，　０．００９３是参比品与呋甾皂苷对照品的换算系数。　２．２正交试验设计　２．２．１醇提工艺　为了考察从蒺藜药材中提取　总皂苷的最佳工艺条件，现以呋甾皂苷含量为指标，　对乙醇浓度（Ａ）、溶剂用量（Ｂ）、提取时间（Ｃ）３个　因素进行考察，其试验因素水平见表１～２。　表１因素水平　由表２可知：Ｒ　＞Ｒ　＞Ｒ　。故可初步确定Ｃ为　主要因素，Ｂ为次要因素，Ａ因素影响较小。据Ｉ、Ⅱ、　Ⅲ值大小确定水平为：Ａ。Ｂ，ｃ　。直观分析结果是否　可靠，以下结合方差分析进一步验证，见表３。　次，每次１　ｈ。　２．２．２最佳提取工艺条件的验证称取干燥蒺藜　粉末（２０目）５０　ｇ各４份，均按最佳工艺条件提取，　且同法测定吸光度，结果处理见表４。　表４验证结果（ｎ＝４）　结果显示，该工艺重复陛皎好。　３讨论　醇提上柱法优于水提上柱法和醇提萃取法。其　中醇提上柱法和醇提萃取法的提取率相近，上柱得　到的产品比萃取得到的产品颜色深，综合考虑工业　生产，上柱可循环利用，萃取则耗费大。因此选择醇　提上柱法进行正交试验。通过正交试验及方差分析　可得，最佳提取工艺条件为Ａ　Ｂ。ｃ　，即用４倍量的　９０％乙醇回流提取２次，每次１　ｈ；皂苷为蒺藜主要　有效成分，该研究可为皂苷的提取提供参考。在正　交试验过程中，醇洗脱液浓缩时会出现淡绿色的小　油珠，且随着提取条件的不一样，油珠量也有所差　别，此现象有待进一步研究。醇提液冷却后抽滤比　较困难，应趁热抽滤。浓缩后的提取液可结合抽滤、　离心后，再取上清液上柱。大孔吸附树脂，可用ｐＨ　＝３的醇液洗柱后，再用大量水洗至中性。　［参考文献］　［１］　周美琼，利春风，欧阳军，等．心脑舒通临床应用的研究进展　［Ｊ］．中华临床医学研究杂志，２００６，１２（４）：５１６－５１８　［２］殷翔，刘维，严伟民，等．蒺藜皂苷水提工艺研究［Ｊ］．上海　医药，２００４，２５（５）：２３１－２３２　［３］　王霄呖，李多伟，令狐昱慰，等．正交试验法优选刺蒺藜皂苷的　提取工艺［Ｊ］．西北药学杂志，２００８，２３（１）：２４－２６　（收稿日期：２００９￣６－０３；修回日期：２００９—１２　１４）　（本文编辑梁爱君）