实验一游离氨基酸测定

实验一游离氨基酸测定

实验一：游离氨基酸测定

实验学时：3学时

实验类型：验证

实验要求：必修

一、实验目的

1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。

二、实验内容

使用甲醛滴定法测定游离氨基酸

三、实验原理

氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。但可以用甲醛法测量。在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的 -氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮

R-NH3+→H++R-NH2

R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)2

4 NH4+ + 6 HCHO == (CH2)6N4H+ + 3 H+ + 6 H2O

滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%。如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L，即滴定后最终浓度为6 %-9 %。

四、实验组织运行要求

集中授课形式

五、实验条件

1．试剂

(1)40％中性甲醛溶液: 在50mL 36 % ~ 37 %甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液，然后

用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和)

(2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液

(3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液

(4)10%(体积分数)乙酸溶液

2．玻璃仪器

⑴50ml容量瓶

⑵20ml移液管

⑶碱式滴定管

⑷50ml量杯

⑸250ml三角瓶

六、实验步骤

(1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg)，置入研钵中，加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。

(2)样品滴定在三角瓶中加入2mL样品滤液，加水4mL，3滴酚酞指示剂，摇匀后用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定到微红色。然后加入2mL中性甲醛溶液，摇匀，放置片刻，再用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定回到微红色中点，记下甲醛加入后样品消耗NaOH标准溶液的体积。同样，取6mL水按以上操作做空白实验。

七、计算

-氨基氮含量(%)=(V-V0)×c×0.014×(1/2)×50×(1/m)×100

式中：

V—加甲醛后样品消耗NaOH标准溶液体积(mL)

V0—加甲醛后空白消耗NaOH标准溶液体积(mL)

c—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)

0.014—消耗1ml 1mol/L NaOH标准溶液相当于氮的质量(g)

2—吸取样品滤液的体积(mL)

50—样品稀释液的总体积(mL)

m—称取试样质量(g)

八、讨论

(1)甲醛法中除氨态氮外别的氮也能起反应(如铵盐、酰胺等)，故误差较大。另外由于各种氨基酸的等电点不同，故确定一个合适的滴定终点较为困难。

(2)脯氨酸与甲醛作用后，生成不稳定化合物，致使滴定结果偏低，酪氨酸含有酚基，

滴定时要消耗一定的碱，可使滴定结果偏高。溶液中若有氨存在也可与甲醛反应，使结果偏高。

九、思考题

若溶液中有铵存在测定结果会偏高还是偏低

十、实验报告