高效液相色谱法测定蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的含量

Modern Food工程技术ｄｏｉ：10.1６７３６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｎ４１－１４３４／ｔｓ．２０１６．１２．０３４高效液相色谱法测定蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的含量Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ　Ｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｄｉｓｏｄｉｕｍ　Ｓａｌｔ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　Ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　Ｆｒｕｉｔｓ　ｂｙ　Ｈｉｇｈ　Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ◎韩秋珍1，2，3，周芳梅1，3，张思妹2，3（1.广东省食品工业公共实验室，广东　广州　510308；2.广东省食品工业研究所，广东　广州　510308；3.广东省食品质量监督检验站，广东　广州　510308）Han Qiuzhen1,2,3, Zhou Fangmei1,3, Zhang Simei2,3（1. Guangdong Provincial Public Laboratory of Food Industry, Guangzhou 510308, China; 2. Guangdong Food Industry Institute, Guangzhou 510308, China; 3.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station, Guangzhou 510308, China）摘　要：运用高效液相色谱法测定以蜜饯中乙二胺四乙酸二钠。样品用水溶解，加入氯化铁溶液，采用C18柱分离，以甲醇和0.075 moL/L KH2PO4水溶液进行梯度洗脱，出峰时间定性，外标法定量。结果表明：该方法的乙二胺四乙酸二钠检出限为20 mg/kg，线性范围为2~50 μg/mL，相关系数r=0.999 83，回收率为94.2%～97.5%，相关标准偏差（RSD）0.47%。该方法前处理简便、灵敏度高、分离效果好、精确度高和精密度好，对蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的含量测定更有针对性。关键词：乙二胺四乙酸二钠；高效液相色谱法；蜜饯Ａｂｓｔｒａｃｔ：An analytical method for ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt in preserved fruits by high performance liquid chromatography was developed.Using pure water,FeCl3 reagent, using C18 column separation, with methanol and 0.075 mol/L KH2PO4 solution gradient elution，high performance liquid chromatography was used to qualititative and quantitative analysis.Results show that the method of ethylenediamine tetraacetic acid disodium detection limit of 20 mg/kg, the linear range is 2 ~ 50 μg/mL, correlation coefficient r = 0.999 83, the recovery rate of 94.2%～97.5%, relative standard deviation (RSD) is 0.47%. The method is accurate,repeatable and suitable for the determination of ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt in preserved fruits.Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt; High performance liquid chromatography; Preserved fruits中图分类号：TS207.3XIANDAISHIPIN现代食品/91Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.工程技术Modern Food乙二胺四乙酸二钠，主要作为稳定、凝固剂、抗氧化剂、防腐剂。我国《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）中允许乙二胺四乙酸二钠用于果酱、地瓜果脯、腌渍的蔬菜、罐头和饮料等[1]。但是，食入过多的乙二胺四乙酸二钠，会影响人体健康，造成微量元素的损失，从而诱发一系列的疾病[2]。目前仅有一个行业标准[3]SN/T 3855-2014《出口食品中乙二胺四乙酸二钠的测定》可进行食品中乙二胺四乙酸含量的检测，而国内有关乙二胺四乙酸二钠检测方法的研究，也主要集中在酱腌菜、油炸小食品、罐头等[2，4-9]。目前未有蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的检测方法。由于蜜饯中含有的杂质较多，SN/T 3855-2014并不适用于蜜饯的检测。蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的检测，净化过程的优化成为分析的重点。因此，根据蜜饯的特性展开蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的分析技术研究很有必要。化铁溶液，涡旋混匀，超声15 min，冷却后用水定容至50 mL。用0.45 μm滤膜过滤，滤液备用。1.2.3　色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-Aq（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流速：0.3 mL/min，柱温：30 ℃，流动相为甲醇，B为甲醇，D为0.075 moL/L KH2PO4水溶液（10.2 g至1 000 mL，调节pH至3.0梯度洗脱，洗脱条件见表1，检测波长为260 nm。表１　梯度洗脱程序表时间/min010161730流动相配比/%B5151555D95858595951.2.4　标准曲线的测定分别取乙二胺四乙酸二钠系列标准溶液各 20 μL，高效液相色谱分析，以乙二胺四乙酸二钠质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。1.2.5　样品测定取样品滤液20 μL作高效液相色谱分析，测定其峰面积，以标准曲线查得测定液中乙二胺四乙酸二钠的含量。１　材料与方法1.1　仪器与试剂Agilent1260高效液相色谱仪，配备二极管阵列检测器；甲醇（色谱纯）；磷酸（AR)；三氯化铁（AR)以及实验用水等。乙二胺四乙酸二钠标准品（纯度为99.97%）SGW（E）060311。２　结果与分析　2.1　样品前处理方法的改进由于SN/T 3855-2014《出口食品中乙二胺四乙酸二钠的测定》中没有规定蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的检测方法。很多文献中测定乙二胺四乙酸二钠时，会加入5 mL三氯甲烷进行衍生化后的净化，试验蜜饯样品中加入三氯甲烷和不加三氯甲烷，结果没有明显差异（见图1和图2），最终确定样品5 g至50 mL离心管中，加30 mL水，涡旋混匀，超声15 min，接着加入1 mL氯化铁溶液，涡旋混匀，超声15 min，冷却后用水定容至50 mL。用0.45 μm滤膜过滤，滤液备用。根据蜜饯样品的特性，不需沉淀蛋白和脂肪，简化了前处理过程，大大提高了工作效率。 1.2　方法1.2.1　标准溶液配制准确称取乙二胺四乙酸二钠标准品0.1 g（精确至0.000 1 g）至100 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得质量浓度为1 mg/mL的乙二胺四乙酸二钠储备液，4 ℃储存备用。分别吸取乙二胺四乙酸二钠储备液20、50、100、200 μL和500 μL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，即得含乙二胺四乙酸二钠2、5、10、20 μg/mL和50 μg/mL的系列标准溶液。1.2.2　样品处理准确称取均匀样品5 g至50 mL离心管中，加 30 mL水，涡旋混匀，超声15 min，接着加入1 mL氯92/现代食品XIANDAISHIPINCopyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.Modern Food工程技术图１　样品前处理不加三氯甲烷图图２　样品前处理加三氯甲烷图2.2　流动相的选择据文献报道，分析乙二胺四乙酸二钠常用的流动相为四丁基氢氧化铵水溶液等离子对试剂，试验一选择甲醇和四丁基氢氧化铵水溶液作为流动相，试验二选择甲醇和0.075 moL/L KH2PO4水溶液作为流动相，所得标样谱图试验结果（见图3和图4），考虑到选用离子对试剂会对色谱柱产生不可逆的影响，而且用离子对试剂时在谱图上有个较大的溶剂峰，故实验选择了甲醇和0.075 moL/L KH2PO4水溶液作为流动相。实验发现，选择等度洗脱时（见图5），目标分析物与样品中的杂质难以分离，杂质干扰较大，因此在实验中选择了梯度洗脱（见图6），有效地将目标分析物与杂质分离，且样品测定效果较好。XIANDAISHIPIN现代食品/93Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.工程技术Modern Foodmin图３　甲醇和四丁基氢氧化铵水溶液作为流动相的乙二胺四乙酸二钠色谱图min　图４　甲醇和０．０７５　ｍｏｌ／Ｌ　ＫＨ２ＰＯ４水溶液作为流动相的乙二胺四乙酸二钠色谱图min图５　等度洗脱的样品色谱图94/现代食品XIANDAISHIPINCopyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.Modern Food工程技术min图６　梯度洗脱的样品色谱图2.3　线性范围分别配制2、5、10、20 μg/mL和50 μg/mL的乙二胺四乙酸二钠标准溶液，按1.2.3中色谱条件上机测定，以乙二胺四乙酸二钠质量浓度x为横坐标，峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，回归方程y=87.84x-41.59，相关系数为0.999 83（见图7）。本底值/（g/kg）0.130.130.13表２　方法的加标回收率表加入标准量测得加入标准量值回收率平均回收率/mg/mg/%/%0.3250.6501.3000.3170.6121.24897.594.296.095.92.5　方法精密度取同一样品6份，在样品中加入标准量0.500 mg，按1.2.2进行样品处理，按上述1.2.3中色谱条件上机测定，进行重复性实验，结果见表3，6次平行进样的RSD为0.47%。表３　方法的精密度表（ｎ＝６）含量/（g/kg）10.49120.49030.49340.48750.49260.488平均值0.490RSD/%0.47图７　乙二胺四乙酸二钠的相关系数和回归方程图2.4　方法的加标回收率在样品中加入低、中、高3个水平标准溶液，按1.2.2进行样品处理，按上述1.2.3中色谱条件上机测定，结果见表2，回收率范围为94.2%～97.5%，平均回收率为95.9%。2.6　检出限在空白蜜饯中添加20 mg/kg的乙二胺四乙酸二钠时，按1.2.3中色谱条件上机测定，这时信噪比大于10，故检出限定义为20 mg/kg。XIANDAISHIPIN现代食品/95Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.工程技术Modern Food３　结论本实验参照SN/T 3855-2014，针对蜜饯的特点，优化了前处理方法，采用高效液相色谱法，甲醇和0.075 moL/L KH2PO4水溶液作为流动相进行梯度洗脱测定蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的含量。实验结果表明，该方法前处理简便、灵敏度高、分离效果好、精确度高、精密度好，对蜜饯中乙二胺四乙酸二钠的含量测定更有针对性。参考文献：　[1]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 2760-2014食品安全国家标准 食品添加剂使用标准[S].北京：中国标准出版社，2014.[2]郑睿行，张　旭，方　芳，等.高效液相色谱法测定酱腌菜制品中EDTA残留量[J].中国食品添加剂，2011（2）：212-219.[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.SN/T 3855-2014 出口食品中乙二胺四乙酸二钠的测定[S].北京：中国标准出版社，2014.二钠的高效液相色谱法测定[J].标准科学，2013（6）：14.[5]刘　波.甜蜜素检测方法研究进展[J].中国食品添加剂，2007（2）：218-222.[6]张晓华，曾繁华，张锐夫.HPLC-MS/MS测定鱼罐头中乙二胺四乙酸二钠残留量[J].化学工程师，2015，29（6）：39-43.[7]杨长志，韩广源，姜　冰，等.UPLC_MS_MS法测定八宝粥罐头中乙二胺四乙酸二钠残留量[J].食品科学，2015（4）：208-212.[8]吕晓华，文　红，许红琴.高效液相色谱法测定板栗罐头中乙二胺四乙酸二钠的含量[J].中国卫生检验杂志，2009，19（3）：517-518. [9]魏冬旭，胡　坤，孙　莹，等.高效液相色谱法测定食品中乙二胺四乙酸二钠[J].检验检疫学刊，2013（6）：50-53.基金项目：2013年国家发展改革委、工业和信息化部产业振兴和技术改造专项（食品企业质量安全检测技术示范中心建设）。 [4]陈肇臻，刘小刚.油炸小食品中乙二胺四乙酸国家食品药品监督管理总局通告4批次肉制品不合格近期，国家食品药品监督管理总局组织抽检肉及肉制品、乳制品、薯类及膨化食品等３类食品３０１批次样品，抽样检验项目合格样品２９７批次，不合格样品４批次。总体情况：肉及肉制品１４０批次，不合格样品４批次，占２．９％；乳制品７１批次，薯类及膨化食品９０批次，均未检出不合格样品。不合格产品情况如下：聚美宝京东全球购专营店在京东（网站）全球购销售的标称原产自美国Ｃｏｓｔｃｏ　Ｗｈｏｌｅｓａｌｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ生产的ｋｉｒｋｌａｎｄ牛肉条，山梨酸检出值为０．８８　ｇ／ｋｇ。比标准规定（不超过０．０７５　ｇ／ｋｇ）高出１０．７倍。食之趣进出口贸易（上海）有限公司在１号店（网站）商城销售的标称产自中国香港颂巢食品（香港）有限公司生产的香辣手撕牛肉片，菌落总数检出值为１１　０００ＣＦＵ／ｇ。比标准规定（不超过１０　０００　ＣＦＵ／ｇ）高出１０％。96/现代食品XIANDAISHIPIN杏花楼官方旗舰店在１号店（网站）销售的标称上海杏花楼食品有限公司生产的咸鸡（酱卤肉制品），大肠菌群检出值为９３０　ＭＰＮ／１００　ｇ。比标准规定（不超过１５０　ＭＰＮ／１００　ｇ）高出５．２倍。麦卡休闲食品专营店在京东（网站）销售的标称晋江力绿食品有限公司生产的猪肉片（香辣味），菌落总数检出值为１６０　０００　ＣＦＵ／ｇ。比标准规定（不超过１０　０００　ＣＦＵ／ｇ）高出１５倍。对上述抽检中发现的不合格产品，生产企业所在地上海、福建等省（市）食品药品监管部门已责令企业查清产品流向，召回不合格产品，并分析原因进行整改；经营单位所在地北京、上海等省（市）食品药品监管部门已要求有关单位立即采取下架等措施，控制风险，并依法予以查处。查处情况于２０１６年８月３１日前报国家食品药品监督管理总局食品安全监管三司并向社会公布。（摘编自国家食品药品监督管理总局网站）Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. 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