抗枣疯病枣树品种酚类物质的薄层层析分析

第１期　河北林业科技　２００６年２月　抗枣疯病枣树品种酚类物质的薄层层析分析　郭晓军，温秀军，孙朝晖，王振亮，李梦钗，刘满光　（河ＪＥ省林业科学研究院，河北石家庄０５００６１）　摘要：该文通过筛选出来的抗病品种壶瓶枣（Ｈｕ系列）、婆枣单株（Ｊｌ系列）和作为对照的感病品种当地婆枣、酸枣　共３个品种１Ｏ个样品，于２００２～２００３年对与植物抗性有关的酚类物质进行了薄层层析分析，结果发现：抗病材料与感　病材料以及不同材料品系间均有显著差异，出现了明显不同Ｒｆ的荧光带，不仅为寻找抗病材料中与其抗病有关的物质　提供了重要的线索，也为揭示其抗病机理起到了一定的推动作用。　关键词：枣疯病；酚类物质；薄层层析　中图分类号：￥６６５．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００２～３３５６（２００６）０１—０００１—０２　枣疯病是由植原体（Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ）引起的一种毁灭性　以上）后，１２０００ｒｐｍ离心２０ｍｉｎ，收集上清液甲醇相，沉淀　侵染病害，通常小树１．－２ａ，大树３—６８便逐渐枯死，已有　继续加甲醇溶解抽提，将甲醇相合并，直至沉淀变白为　的调查表明枣疯病在我国２５个省（市）均有不同程度的　止；将所收集的上清液通入氮气流吹除甲醇，所留体积为　发生，大量枣树毁灭绝产，造成了巨大的经济损失，严重　原来的１／２～１／３左右（可在６０℃水浴中吹），向剩余的上　阻碍了枣树产业的发展，为此，许多学者对枣疯病的防治　清液中加２倍体积的石油醚萃取２～３次（上层为石油醚　技术进行了大量的探索研究，采取环剥截枝、刨除病树、　相，下层为甲醇相），再用氮气流将甲醇相吹千，用少量甲　药物输液治疗、药杀传病昆虫、选育抗病品种、组织培养　醇（含ＢＨＴ抗氧化剂）将甲醇相吹干残留物溶解并转移　脱毒苗等多种措施，其中，选育抗病品种是解决这一类维　到离心管中，于冰箱内一２０℃下保存备用。　管束系统侵染性病害最经济有效的措施，基于这一解决　表１　酚类物质分析材料的基本情况　枣疯病防治的根本途径，河北省林业科学研究院枣疯病　样品编号　病原接种情况　采样说明　备　注　课题组在１９９６～２００２年的６ａ时间里，通过反复嫁接病枝　和病皮进行７次病原传病试验，筛选出几个生长良好且　…Ｊ　一一接病皮。Ｌ１０　１　Ｈ　　１９９８　、２　、００　０　　苗木上的健枝　２｛］０１　至今没有表现出任何丛枝症状的品种和单株，现已证明　年接病棱　枝　…　’　竺　。　９９９腐’了具有很强的抗性和良好的抗性遗传稳定性，为了进一　儿１儿　一一０　２　Ｈ　　接病皮。　、１９９８　２０　、　苗木上的健枝　：　２００１　年接病枝　００　步探讨抗病品种和单株与寄主病原的互作过程，揭示其　’　竺　：　…　’　。　抗病机理。于２００２—２００３年专门对与植物抗性有关的酚　类物质进行了薄层层析分析，旨在寻找与抗病有关的物　Ｊ　１２４　一　皮ｔ　年，接　１９病罴　８枝　、２　００　０　，２０病０１　茁术上的健枝　★／＇ｌｆＯｔＨ　￣，。　ｌｒｌ。　黻苗’　质或因子，并通过基因途径解决枣疯病问题，同时也为枣　疯病的防治提供理论依据和参考。　１试验材料与方法　１．１试验材料　ｌ－ｌｕ６一Ｈ供试的枣树材料均采自河北省保定市唐县军城镇枣　一　箍　接年病接病皮枝，２　０００、２００１　茼木上的健枝　且料　睇　’　树试验栽培区，面积４００ｍ　，土壤和管理条件一致，被测样　ＪＬ１・Ｄ　有进行病原接种　疯枝　普通已表现疯状的婆枣　品分别为筛选出来的抗病品种壶瓶枣（Ｈｕ系列）、婆枣单　ＪＩ　１一Ｈ　没有进行病原接种　健枝　普通健康婆枣　株（Ｊ１系列）和作为对照的感病品种当地婆枣、酸枣共３　￥ｕａｎ—Ｄ　没有进行病原接种　城枝　地野生、袁现疯状的酸枣　个品种１０个样品，并分别于２００２—２００３年的７—９月进　Ｓｕａｎ—Ｈ　没有进行惰原接种　健枝　当地　ｆ生、健康酸枣　行了酚类物质层析分析，取样材料具体说明见表１。　１．２酚类物质分析　汽：“一”前相同的ｌ丧＿示所取的材料在同一棵树上（Ｓｕａｎ—Ｄ　１．２．１　酚类物质的提取称取５ｇ的新鲜茎叶于研钵中，　与Ｓｕａｎ—Ｈ例外）；“Ｄ”｜＆示嫁接　该树疯接穗上长出的枝．…Ｈ　表示该本树．　长ｌ｝Ｊ的健枝。　加一定体积的无水甲醇研磨，定容，冰箱内４ｌ℃下抽提（２ｈ　１．２．２酚类物质的薄层层析　将上述的酚类物质提取　液参照张立名等编写的《现代生物化学分析原理》的薄层　收稿日期：２００５—０６—１３　层析方法，作为层析固定相的硅胶板（宽ｌＯｅｍ）两块，分　维普资讯 http://www.cqvip.com

第１期　河北林业科技　２００６年２月　别均匀点上所测样品提取出的酚类物质（约３０ｕ１），然后　月、８月、９月采集的１０个样品中，ＳｕａｎＤ（图１Ｂ）样品每次　分别放人有异丙醇：氨水：水（８：ｌ：１）和正丁醇：乙酸：　均出现了很强的Ｒｆ值约为０．１８的荧光点，其它样品只有　水（４：１：５）展层流动相的缸（带盖）中进行层析，结束后　很淡的荧光出现或没有荧光，其中２００２年９月和２００３年　在紫外光下进行荧光观察。　８月、９月采集的样品中，除仍在发病的酸枣疯枝ＳｕａｎＤ　２结果与分析　样品中砒值约０．１８的位置出现了很强的荧光点，在抗病　通过层析分析发现在异丙醇：氨水：水相中，２００２年　婆枣单株ＪＬ１０—１一Ｈ和ＪＬ２４一Ｈ样品中没有出现荧光　的７月、９月和２００３年的７月、８月、９月采集的ＪＬ１０—２　点外，在ＪＬ１０—２一Ｈ中出现了很弱的荧光点，在病材料　一Ｈ、ＪＬ２４一Ｈ、Ｈｕｌ—Ｈ、ＪＬ２一Ｈ、Ｈｕ６一Ｈ材料中均发现　Ｈｕｌ—Ｄ中出现了两个荧光点，Ｒｆ值分别为０．１４和０．２０，　有不同程度的浅蓝色荧光带，其Ｒｆ值多在０．５０左右，其　普通婆枣病材料在Ｒｆ值０．１７位置上出现了荧光点，在抗　中以Ｈｕ６一Ｈ（图ｌＡ）、ＪＬ１０—２一Ｈ、ＪＬ２４一Ｈ材料最明　病的壶瓶枣两个材料Ｈｕ一１、Ｈｕ一６中也发现了荧光点，　显，其中ＪＬ１０—２一Ｈ、ＪＬ２４一Ｈ为婆枣抗病单株，Ｈｕｌ—　Ｒｆ值约为０．１５。　Ｈ、Ｈｕ６一Ｈ为壶瓶枣单株，ＪＬ２一Ｈ为普通婆枣健树。在　３小结与讨论　正丁醇：乙酸：水相中，２０ｏ２年７月、８月、９月和２００３年７　通过对抗病材料与感病材料体内酚类物质进行的薄　层层析分析，结果表明，选择的儿系列（婆枣）抗病单株　在酚类物质代谢方面与抗病的Ｈｕ系列（壶瓶枣）存在差　异，两者在酚类物质的含量和成分上均与感病材料差异　显著。而在层析中观察到的不同Ｒｆ值的荧光点（斑）是　否与抗（或致）枣疯病以及为何种酚类物质仍不明确，还　有待于进一步研究。　参考文献　Ａ　［１］温秀军，孙朝晖，孙士学，等．抗枣疯病枣树品种及品系的选择　［Ｊ］．’林业科学。２００１，３７（５）：８７－９２．　［２］张立名，王贤舜．现代生物化学分析原理［Ｍ］．北京：中国科学　技术大学出版社，１９９１．　［３］田国忠．泡桐丛枝病植原体与泡桐的生化和分子互作研究　［Ｄ］．北京：中国农业大学植保学院博士论文，１９９９．　［４］ＮｉｃｈｏｌｓｎＲ　Ｌ，Ｈａｍｍｅｒｓｃｈｍｉｄｔ　Ｒ．Ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＰｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ，１９９２，３０：　３６９—３８９．　Ｂ　［５］Ｃａｎａｌ　Ｍ　Ｊ，Ｓａｎｃｈｅｚ　Ｒ　ａｎｄ　Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ　Ｂ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ　ｏｎ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　Ｙｅｌｌｏｗ　Ｎｕｔｓｅｄｇｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，　图１　酚类物质薄层层析出现的荧光点　１９８７．６９：６２７—６３２．　・２・