实验 土壤速效磷的测定
(碳酸氢钠法)
一、目的和要求
掌握比色法测定土壤速效磷的方法，了解土壤中磷素形态及其土壤供磷能力与土壤速效磷的关系。掌握土壤速效磷的浸提，浸提液的处理，标准曲线制作，显色，比色，计算。
二、方法原理
石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷。一般用碳酸盐的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。同时由于碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO3-、CO32-等阴离子，有利于吸附态磷的置换，因此NaHCO3不仅适用石灰性土壤，也适用于中性和酸性土壤中速效磷的提取。
待测液中的磷用钼锑抗试剂显色，使黄色的锑磷钼杂多酸还原成为磷钼蓝进行比色测定。
三、主要仪器及试剂配制
1、 仪器：往复振荡机、分光光度计或比色计
2、试剂
（1）0.5mol/LNaHCO3浸提液：溶解NaHCO342.0g于800mL水中，以0.5mol/LNaOH溶液调节浸提液的pH至8.5。此溶液曝于空气中可因失去CO2而使pH增高，可于液面加一层矿物油保存之、此溶液贮存于塑料瓶中比在玻璃中容易保存，若贮存超过一个月，应检查pH值是否改变。
（2）硫酸钼锑贮存液：取蒸馏水400mL于1000ml烧杯中，将烧杯浸在冷水中。缓慢地加入208.3 mL浓H2SO4，边加边搅拌，并将其冷却到室温。另称取钼酸铵[（NH4)6Mo7O24?4H2O]20g，溶于约60℃的200ml蒸馏水里，冷却。然后将硫酸溶液徐徐倒入钼酸铵溶液中，不断搅拌。再加入100ml0.5%酒石酸锑钾溶液（取酒石酸氧锑钾0.5g ,溶解于100mL水中），用蒸馏水稀释至1000ml，充分摇匀，贮存于棕色瓶中。
（3）钼锑抗混合显色剂：临用前（当天），称取左旋抗坏血酸（C6H8O5，化学纯）1.5g，溶于100 mL钼锑混合液中，混匀，此即为钼锑抗混合显色剂。有效期24小时，若贮存在冰箱中则有效期更长。
（4）磷标准溶液：准确称取在45℃烘箱中烘干4—8小时的磷酸二氢钾（分析纯）0.2197g于小烧杯中，以少量水溶解，将溶液全部洗入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，充分摇匀。此溶液即为含50ppm的磷基准溶液。吸取该标液50mL，稀释至500 mL，即为5ppm的磷标准溶液（此溶液不能长期保存）。比色时按标准曲线系列配制。
4.操作步骤
称取通过20目筛子的风干土样2.5g（精确到0.001g）于100mL三角瓶（具盖）中，加入0.5mol/LNaHCO3浸提液50mL，塞紧瓶塞，在振荡机上振荡30min，立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于100mL三角瓶中。
吸取滤液10mL（含磷量高时吸取2.5～5.0mL，同时应补加0.5mol/LNaHCO3溶液至10mL）于50mL容量瓶中，加硫酸钼锑抗混合显色剂5ml，充分摇匀，排出二氧化碳后加水定容至刻度。放置30min后，用880nm波长进行比色。以空白液的吸收值为0，读出待测液的吸收值（A）。
磷标准曲线绘制:分别准确吸取5ppm标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于50mL容量瓶中，再加入0.5mol/LNaHCO3 10mL，加硫酸钼锑抗混合显色剂5ml，加水定容，摇匀。同待测液一样进行比色，绘制标准曲线。最后溶液中磷的浓度分别为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μg/mL P。
5.结果计算
土壤中有效磷（P）含量（mg/Kg）＝（ρ×V×ts/m×103×k）×1000
式中:ρ——从工作曲线上查得P得质量浓度（μg/mL）；
V——显色时定容体积（mL）；
ts——为分取倍数（即浸提液总体积与显色对吸取浸提液体积之比）；
m——风干土质量（g）；
k——将风干土换算成烘干土质量的系数；
103——换算系数，将μg换算成mg；
1000——换算成每kg含P量.
五、作业
根据以下公式计算土壤中速效磷的含量
显色液磷mgkg-1数×显色液体积×分取倍数
土壤中速效磷mgkg-1＝—————————————————――――――――—————————
烘干土重（克）
显色液磷mgkg-1数：从工作曲线查得显色液的磷mgkg-1数
显色液体积：50毫升
浸提液总体积(50毫升)
分取倍数＝————--------—————————
吸取浸出液毫升数
六、参考指标
土壤速效磷 mgkg-1等级
＜3 很低
3—7 低
7—20 中等
>20 高
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