非洲猪瘟实验室诊断方法研究进展

兽医实验室2016年第5期www.zgzysy.com非洲猪瘟实验室诊断方法研究进展苏娇 吕春 聂翠凤/内蒙古巴彦淖尔市杭锦后旗疫控中心非洲猪瘟是各主要养猪国家最担心发生的猪疫病之一，因为它可以引起免疫抑制，容易造成很高的死亡率，可达100%，目前应对该病尚无有效的治疗方法或疫苗。据报道，与我国相邻的俄罗斯等国家不断有该疫情的暴发，该疫情已影响到俄罗斯国土面积的三分之一以上，这给我国动物疫病防控工作带来了很大的威胁。由此可见，有效的实验室诊断方法在非洲猪瘟防控中显得尤为重要。本文就非洲猪瘟的实验室诊断方法研究进展进行了综述。试验，试验表明其敏感性高于单抗酶联免疫吸附试验。我们国内也有人以VP73纯化蛋白为包被抗原，建立了间接酶联免疫吸附试验来检测非洲猪瘟病毒血清抗体，与商品化的阻断酶联免疫吸附试验相比，其具有较好的敏感性和特异性。目前主要是间接酶联免疫吸附试验和竞争或阻断酶联免疫吸附试验来检测非洲猪瘟病毒血清抗体，西班牙某公司已经研制出阻断酶联免疫吸附试验试剂盒，并且已经商品化，也是世界动物卫生组织指定的参考试剂盒，该试剂盒的敏感性和特异性均较好，已被很多国家使用。验方法可用于非洲猪瘟的快速诊断，也可用于监控非洲猪瘟病毒的发生，以便及时采取有效的应急措施，同时因为PCR诊断方法快速、有效，被世界动物卫生组织列为非洲猪瘟病毒的参照诊断方法。Basto󰀡AP等人设计了两对引物，建立了检测非洲猪瘟的巢式PCR方法，该诊断方法与病毒分离和常规PCR相比，此方法更加敏感，可用于非洲猪瘟病毒的流行地区。实时荧光定量PCR克服了传统PCR扩增产物后处理和易污染的缺点，它是利用荧光信号，对整个扩增过程进行实时监测的技术。King󰀡DP等人以非洲猪瘟病毒p72为目的基因，设计了相应的引物和探针序列，建立了实时荧光定量PCR检测非洲猪瘟的诊断方法，该方法更加简便、快速和灵敏。也有相关人士表示，使用实时荧光定量PCR检测感染猪，耗时不足2󰀡h。国内的陈静静等人建立了双重荧光定量PCR，可同时检测古典猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒，只需一步即可完成，可作为鉴别两种病毒的诊断方法。（二）环介导等温扩增技术环介导等温扩增技术操作简便，反应时间短，成本低廉，检测成本远低于荧光定量PCR，无需特殊仪一、非洲猪瘟抗体检测 ——酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验应用于血清抗体的检测，具有操作方便，特异性较好，灵敏度高，适用于大批量样品的检测。国外Perez󰀡Filgueira󰀡DM等人采取了不同地区的猪血清样品进行试验，该试验表明间接酶联免疫吸附试验敏感性高，能够检测到非洲猪瘟病毒早期感染的样品，可以用于早期的特异性抗体检测。Vidal󰀡MI等人建立了固相酶联免疫吸附试验，其检测血清样品的敏感性达0.05󰀡mg/ml。Hutchings󰀡GH󰀡等人建立了间接夹心酶联免疫吸附二、非洲猪瘟病原学检测（一）PCR方法PCR已经广泛的应用于疾病诊断和科学研究中，其具有简单快速、灵敏度高和特异性强的优点。PCR技术无需病毒分离培养，可以直接检测到组织或体液中的病毒，也可以同时检测同一病原不同株或不同病原的检测，为疫病检测提供了有效的技术支撑。国外Agǜero󰀡M等人设计了p72蛋白编码区的引物，建立了检测非洲猪瘟的PCR诊断方法，该试68Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.www.zgzysy.com2016年第5期兽医实验室赛科益生对断奶仔猪腹泻防控及生长性能的研究王建华/武汉纽科源生物科技有限公司 董志刚/江苏农牧科技职业学院仔猪的断奶腹泻是造成仔猪高死亡率的重要因素，近年来呈高发态势。其中大肠埃希菌是造成腹泻的主要原因，防控比较困难，通过在饲料中添加赛科益生来改善肠道环境，调整肠道有益菌群，来解决仔猪的腹泻问题，比传统方法上使用抗生素控制腹泻具有更好的效果。赛科益生具有促进胃肠蠕动，促进食欲，帮助食物的消化的作用，能提高饲料转化率，降低料重比，提高仔猪的生长速度，增加养殖经济效益。为进一步验证其在仔猪断奶防控腹泻和促进生长的效果，并确定其最佳添加剂量，特开展此饲养实验。南泥湾种猪繁育基地进行，试验期35󰀡d，其中断奶前7󰀡d为预试期，断奶当天至断奶后28󰀡d为正试期。（三）实验设计与分组处理在同一栋保育舍内选择同一日龄，按照体重相近，健康状况良好的原则，选择体重在8󰀡kg±0.2󰀡kg的杜长大三元90头，随机分为3组，每组3个重复，每个重复10头。对照组采用基础饲粮饲养，实验I组饲喂基础饲粮+赛科益生1󰀡000󰀡mg/kg，实验II组饲喂基础饲粮+赛科益生500󰀡mg/kg。（四）测定指标󰀡󰀡1.腹泻状况。观察并记录发生腹泻的次数和时间、用腹泻指数、腹泻频率来反应仔猪断奶后28󰀡d的腹泻情况。每天6∶00至18∶00不间断观察仔猪的排粪状况，观察内容包括粪便形态、颜色、排粪次数等，并逐头采集各种形态的粪样于65℃烘箱中测定出水分含量。根据粪中初水分含量和感官记载，对各圈每头猪每次排出的粪便评分，2分以上认为腹泻，统计腹泻指数和腹泻频率。腹泻频率=（腹泻发生头数×腹泻发生天数）/（实一、材料与方法（一）实验材料赛科益生由武汉纽科源生物科技有限公司生产提供，主要成分由大蒜精油、多种维生素、多种氨基酸组成，其中大蒜精油含量≥10%。（二）实验时间与地点实验于2015年8月16日至9月20日在湖北潜江市器设备，整个实验只需水浴锅或金属恒温仪，适用于基层检疫部门，具有更高的实用推广价值。James󰀡HE等人使用环介导等温扩增法检测非洲猪瘟病毒，结果表明该方法与实时荧光定量PCR检测组织和血液样品的结果一致。杨吉飞等人建立了环介导恒温扩增快速检测非洲猪瘟病毒，试验结果表明所建立的诊断方法可有效地用于非洲猪瘟的快速诊断和防控。力的非洲猪瘟病毒抗体，可用作大规模血清样品的筛选，同时也适用于根除计划。PCR诊断技术需具备PCR仪或实时荧光定量PCR仪，可用于非洲猪瘟的疫情监测情况。而环介导等温扩增技术检测非洲猪瘟有待于进一步完善，为临床快速诊断提供一定的技术支撑。参考文献（略）三、小结目前，实验室诊断是监测和控制非洲猪瘟暴发行之有效的办法，因为当前尚无有效的药物治疗或疫苗进行防控。酶联免疫吸附试验适用于检测感染猪的低毒力或中等毒69Copyright©博看网 www.bookan.com.cn. All Rights Reserved.